土壤酸性转化酶（S-AI）活性检测试剂盒（可见分光光度法）

产品内容：

试剂一：液体 100mL×1 瓶，4℃保存；

试剂二：粉剂×1 瓶，4℃保存；临用前加入 25mL 试剂一充分溶解备用；用不完的试剂 4℃保存；

试剂三：液体 20mL×1 瓶，4℃保存。

标准品：粉剂×1 支，4℃保存，10mg 无水葡萄糖。临用前加入 1mL 试剂一溶解,制备 10mg/mL葡萄糖标准液备用。

产品说明：

S-AI 在 pH 为 4.5~5.0（酸性）条件下催化蔗糖不可逆地分解为果糖和葡萄糖，是土壤微生物蔗糖代谢关键酶之一。

S-AI 催化蔗糖降解产生还原糖，进一步与 3,5－二硝基水杨酸反应，生成棕红色氨基化合物， 在 540nm 有特征光吸收，在一定范围内 540nm 光吸收增加速率与 AI 活性成正比。

试验中所需的仪器和试剂：

可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、移液器、1mL 玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水、甲苯。

操作步骤：

一、样品处理：

新鲜土样自然风干或 37℃烘箱风干，过 30~50 目筛。

二、测定步骤及加样表：

1、分光光度计/酶标仪预热 30min，波长调至 540nm，蒸馏水调零。

2、标准液的稀释：将 10mg/mL 葡萄糖标准液用试剂一稀释至 4、3、2、1、0.8、0.6 mg/mL的葡萄糖标准溶液备用。

3、加样表：

混匀，煮沸 10min 左右（盖紧，以防止水分流失），流水冷却后充分混匀，540nm 处蒸馏水调零，记录各管吸光值A，记为 A 测定管、A 对照管、A 标准管、A 空白管。计算ΔA=A 测定管-A 对照管，ΔA 标准=A 标准管-A 空白管。

三、S-AI 活性计算：

1、标准曲线的绘制：

以葡萄糖浓度为 x 轴，相应的ΔA 标准为 y 轴，绘制标准曲线，得到标准方程 y=kx+b；将ΔA 带入公式得到 x（mg/mL）

2、S-AI 活性计算

单位定义：37℃每 g 土壤每天产生 1mg 还原糖定义为一个酶活性单位。

S-AI（U/g）=x×V 酶促÷W÷T

V 酶促：酶促反应总体积，0.820mL；W：样本鲜重，g；T：反应时间：1/24d；

注意事项：

1、如果加入试剂三，煮沸 10min 后有混浊物出现，建议离心除去沉淀（10000rpm，2min），取上清测定吸光度；

2、如果吸光值大于 1，可以将上清液再进行稀释；若吸光值较小，可以减少上清液稀释倍数。两种操作均要注意改变公式中的稀释倍数。