总皂苷含量测试盒说明书（微量法 ）

正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定

测定意义：

皂苷（Saponin）是苷元为三萜或螺旋甾烷类化合物的一类糖苷，主要分布于陆地高等植物中，也少量存在于海星和海参等海洋生物中。 许多中草药如人参、远志、桔梗、甘草、知母和柴胡等的主要有效成分都含有皂苷。有些皂苷还具有抗菌的活性或解热、镇静、抗癌等   有价值的生物活性。

测定原理：

使用超声波提取样品中的皂苷，利用香草醛-高氯酸显色体系测定总皂苷含量。

所需的仪器和用品：

酶标仪、烘箱、水浴锅、可调式移液器、96 孔板、高氯酸、乙酸、超声波清洗器

试剂的组成和配制：

提取液：液体 100ml×1 瓶，4℃保存；

试剂一：24ml×1 瓶，4℃保存；

试剂二：高氯酸，自备；

试剂三：乙酸，自备。

总皂苷提取：

样本烘干，粉碎过筛，称取 0.05g，加入 1mL 提取液，超声提取 1h；8000g，25℃离心 10min，取上清待测。

测定步骤

1、酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 589nm。

2、测定管：取 0.5mL 上清，70℃挥发至干。加入 0.2mL 试剂一和 0.8mL 试剂二，55℃水浴20min。吸取 40μL 加入 96 孔板中，再加入 200μL 试剂三，充分混匀后，589nm 下测定吸光度 A1。

3、空白管：取 0.5mL 提取液，70℃挥发至干。加入 0.2mL 试剂一和 0.8mL 试剂二，55℃水浴 20min。吸取 40μL 加入 96 孔板中，再加入 200μL 试剂三，充分混匀后，589nm 下测定吸光度 A2。计算△A= A1-A2。

总皂苷含量计算：

1、以齐墩果酸为对照品计算

标准状态下的回归曲线为：y = 0.0036x - 0.012，R2 = 0.9968，x 为对照品浓度，μg/mL,y 为吸光度△A。

总皂苷含量(μg/g 干重)=（△A+0.012）÷ 0.0036×V 样÷(V 样÷V 样总×W)

=277.78×（△A+0.012）÷W

2、以人参皂苷 Re 为对照品计算

标准状态下的回归曲线为：y = 1.0233x - 0.0016，R2 = 0.9983，x 为对照品浓度，mg/mL,y 为吸光度△A。

总皂苷含量(μg/g 干重)=（△A+0.0016）÷ 1.0233×V 样÷(V 样÷V 样总×W)×1000

=977.23×（△A+0.0016）÷W

V 样：加入样本体积，0.5mL；V 样总：加入提取液体积，1mL；W：样本干重，g；1000， 毫克到微克的换算系数。