总皂苷含量测试盒说明书（分光光度法）

货号：LE-1-376

正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定

测定意义：

皂苷（Saponin）是苷元为三萜或螺旋甾烷类化合物的一类糖苷,主要分布于陆地高等植物中， 也少量存在于海星和海参等海洋生物中。许多中草药如人参、远志、桔梗、甘草、知母和柴胡等的主要有效成分都含有皂苷。皂苷还具有抗菌的活性或解热、镇静、抗癌等生物活性。

测定原理：

使用超声波提取样品中的皂苷，利用香草醛-高氯酸显色体系测定总皂苷含量。

所需的仪器和用品：

可见分光光度计、烘箱、水浴锅、可调式移液器、1mL 玻璃比色皿、高氯酸、乙酸、超声清洗器

试剂的组成和配制：

提取液：液体 50ml×1 瓶，4℃保存；

试剂一：12ml×1 瓶，4℃保存；

试剂二：高氯酸，自备；

试剂三：乙酸，自备。

总皂苷提取：

样本烘干，粉碎过筛，称取 0.05g，加入 1mL 提取液，超声提取 1h；8000g，25℃离心 10min，取上清待测。

测定步骤：

1、可见分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 589nm，蒸馏水调零。

2、测定管：取0.5mL上清，70℃挥发至干。加入0.2mL试剂一和0.8mL试剂二，55℃水浴20min。吸取 200μL 加入 1mL 玻璃比色皿中，再加入 1000μL 试剂三，充分混匀后，589nm 下测定吸光度 A1。

3、空白管：取 0.5mL 提取液，70℃挥发至干。加入 0.2mL 试剂一和 0.8mL 试剂二，55℃水浴 20min。吸取 200μL 加入 1mL 玻璃比色皿中，再加入 1000μL 试剂三，充分混匀后，589nm 下测定吸光度 A2。计算△A= A1-A2。

总皂苷含量计算：

1、以齐墩果酸为对照品计算

标准状态下的回归曲线为：y = 0.0072x - 0.012，R² = 0.9968，x 为对照品浓度，μg/mL,y 为吸光度△A。

总皂苷含量(μg/g 干重)=（△A+0.012）÷ 0.0072×V 样÷(V 样÷V 样总×W)

=138.89×（△A+0.012）÷W

2、以人参皂苷 Re 为对照品计算

标准状态下的回归曲线为：y = 2.0466x - 0.0016，R² = 0.9983，x 为对照品浓度，mg/mL,y 为吸光度△A。

总皂苷含量(μg/g 干重)=（△A+0.0016）÷ 2.0466×V 样÷(V 样÷V 样总×W)×1000

=488.62×（△A+0.0016）÷W

V 样：加入样本体积，0.5mL；V 样总：加入提取液体积，1mL；W：样本干重，g；1000， 毫克到微克的换算系数。