测定原理：

PAO 催化多胺氧化产生过氧化氢，在过氧化物酶存在的条件下与底物显色，在 550nm 下有特征吸收峰，通过测定吸光值增加速率来反映 PAO 活性。

需自备的仪器和用品：

酶标仪、台式离心机、可调式移液器、96 孔板、研钵、冰和蒸馏水。

试剂组成和配制：

试剂一：液体 120mL×1 瓶，4℃保存； 

试剂二：液体 3mL×1 瓶，4℃保存； 

试剂三：液体 1.5mL×1 瓶，4℃保存； 

试剂四：液体 1.5mL×1 瓶，4℃保存。

粗酶液提取：

1、组织：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 试剂一）进行冰浴匀浆，然后 10000g，4℃离心 20min，取上清，置冰上待测。

2、细菌、真菌：按照细胞数量（10⁴ 个）：试剂一体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细胞加入 1mL 试剂一），冰浴超声波破碎细胞（功率 300w，超声 3 秒，间隔7 秒，总时间 3min）；然后 10000g，4℃，离心 10min，取上清置于冰上待测。

3、血清等液体：直接测定。

1、酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 550nm。

2、样本测定

PAO 活性计算：

（1）按样本蛋白浓度计算：

单位定义：每 mg 组织蛋白在每 mL 反应体系中每分钟 A550 变化 0.001 为一个酶活力单位。

PAO（U/mg prot）＝ΔA×V 反总÷（V 样×Cpr）÷0.001÷T =333.33×ΔA÷Cpr

（2）按样本鲜重计算：

单位定义：每 g 组织在每 mL 反应体系中每分钟 A550 变化 0.001 为一个酶活力单位。

PAO（U/g 鲜重）＝ΔA×V 反总÷(W× V 样÷V 样总)÷0.001÷T =333.33×ΔA÷W

（3）按细菌或细胞密度计算：

单位定义：每 1 万个细菌或细胞在每 mL 反应体系中每分钟 A550 变化 0.001 为一个酶活力单位。

PAO（U/10⁴ cell）＝ΔA×V 反总÷(500×V 样÷V 样总)÷0.001÷T =0.667×ΔA

（4）按液体体积计算

单位的定义：每 mL 液体样本在每 mL 反应体系中每分钟 A550 变化 0.001 为一个酶活力单位。

PAO（U/mL）=ΔA×V 反总÷V 样÷0.001÷T =333.33×ΔA

V 反总：反应体系总体积，0.2mL；V 样：加入样本体积，0.02 mL；V 样总：加入提取液体积，1 mL；T：反应时间，30 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500： 细菌或细胞总数，500 万。