产品名称:外切-β-1,4-葡聚糖酶(C1)/纤维二糖水解酶测试盒
产品规格:50管/24样,100管/48样
产品货号:C1-1-Y,C1-2-Y
免费咨询:0551-66107970
货号 |
产品名称 |
检测方法 |
规格 |
售价(元) |
C1-2-Y |
外切-β-1,4-葡聚糖酶(C1)/纤维二糖水解酶测试盒 |
可见分光光度法 |
50管/24样 |
580 |
C1-1-Y |
外切-β-1,4-葡聚糖酶(C1)/纤维二糖水解酶测试盒 |
微量法 |
100管/48样 |
1100 |
正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定
测定意义:
C1(EC3.2.1.91)存在于细菌、真菌和动物体内,是纤维素酶系的组份之一,C1催化多聚糖链的末端非还原端释放出纤维二糖和葡萄糖。
测定原理:
采用3,5-二硝基水杨酸法测定C1催化微晶纤维素降解产生的还原糖的含量。
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计、水浴锅、离心机、可调式移液器、1mL 玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
试剂的组成和配制:
提取液:液体 50mL×1 瓶,4℃保存;
试剂一:液体 15mL×1 瓶,4℃保存; 试剂二:液体 60mL×1 瓶,4℃保存;
样品测定的准备:
1、细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104 个):提取液体积(mL)为 500~1000:1 的比例(建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率 20%或 200W,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次);8000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
2、组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL 提取液),进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
3、血清(浆)样品:直接检测。
测定步骤:
1、 分光光度计预热 30min 以上,调节波长至 540nm,蒸馏水调零。
2、加样表(在 EP 管中依次加入下列试剂):
试剂名称(μL) |
测定管 |
对照管 |
样本 |
50 |
50 |
试剂一 |
500 |
|
蒸馏水 |
|
500 |
混匀,37℃准确水浴 2h
试剂二 |
1000 |
1000 |
混匀, 90℃水浴 10min(盖紧,防止水分散失),冷却后,测 540nm 下吸光值 A,计算ΔA=A 测定管-A 对照管。每个测定管需设一个对照管。
C1 活性计算
1、标准条件下测定回归方程为y = 6.4078x - 0.0673;x 为标准品浓度(mg/mL),y 为吸光值。
2、血清(浆)C1 活力的计算
单位的定义:每mL 血清(浆)每分钟催化产生 1μg 葡萄糖定义为一个酶活力单位。
C1 活力(μg /min/mL)= [1000×(ΔA+0.0673) ÷6.4078×V 反总]÷V 样÷T
=14.305×(ΔA+0.0673)
3、细胞、细菌和组织中 C1 活力的计算
按照蛋白浓度计算
单位的定义:每 mg 组织蛋白每分钟催化产生 1μg 葡萄糖定义为一个酶活力单位。
C1 活力(μg /min/mg prot)=[ [1000×(ΔA+0.0673) ÷6.4078×V 反总]÷(V 样×Cpr) ÷T=14.305×(ΔA+0.0673) ÷Cpr
按样本鲜重计算
单位的定义:每g 组织每分钟催化产生 1μg 葡萄糖定义为一个酶活力单位。
C1 活力(μg /min /g 鲜重)=[1000×(ΔA+0.0673) ÷6.4078×V 反总]÷(W× V 样÷V 样总) ÷T=14.305×(ΔA+0.0673) ÷W
按细菌或细胞密度计算
单位的定义:每 1 万个细菌或细胞每分钟催化产生 1μg 葡萄糖定义为一个酶活力单位。
C1 活力(μg /min /104 cell)=[1000×(ΔA+0.0673) ÷6.4078×V 反总]÷(500×V 样÷V 样总) ÷T=0.0286×(ΔA+0.0673)
1000:1mg/mL=1000ug/mL;V 反总:反应体系总体积,0.55mL; V 样:加入样本体积,0.05 mL;V 样总:加入提取液体积,1 mL;T:反应时间,120 min;Cpr:样本蛋白质浓度, mg/mL;W:样本质量,g;500:细菌或细胞总数,500 万。
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