食品中亚硝酸盐含量检测试剂盒说明书（可见分光光度法）

注意：正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定。

产品内容：

提取液一：液体50mL×1瓶，室温保存。

提取液二：液体50mL×1瓶，室温保存。

提取液三：液体50mL×1瓶，室温保存。

提取液四：粉剂×1支，室温保存。

试剂一：液体25mL×1瓶，4℃避光保存。

试剂二：液体25mL×1瓶，4℃避光保存。

标准品：液体1mL×1支，1μmol/mL亚硝酸钠标准溶液，4℃保存。

产品说明：

在食品中，亚硝酸盐可与肉品中的肌红素结合而更安定，在食品加工业中作为保色剂，以维持肉制品的良好外观，并防止肉毒梭状芽孢杆菌的产生，提高食用肉制品的安全，但是人体长期摄入亚硝酸盐过量的食品，可诱发消化系统癌变。

在酸性条件下，亚硝酸盐与对氨基苯磺酸反应生成重氮化合物，再与N-1-萘基乙二胺形成紫红色偶氮化合物，在540nm处有特征吸收峰。

自备实验用品及仪器：

天平、研钵或匀浆器、台式离心机、可见分光光度计、1mL玻璃比色皿、蒸馏水。

操作步骤：

一、样品处理

称取样品约1g，破碎，加入1mL提取液一，沸水浴15min，冷却至室温，加入1mL提取液二，震荡摇匀，加1mL提取液三，用镊子加少量提取液四（约2mg），静置30min，10000rpm/min离心15min，取上清液待测。

二、测定步骤和操作表

1、可见分光光度计预热30min以上，调节波长至540nm，蒸馏水调零。

2、将标准品用蒸馏水稀释成0.04µmol/mL标准管。

3、操作表

（1） 按样本鲜重计算

亚硝酸含量（μmol/g鲜重）=(A样本-A空白）÷[(A标准-A空白)÷C标准]×V样本÷(W×V样本÷V总)=0.12×[(A样本-A空白）÷(A标准-A空白)]÷W。

（2） 按样本蛋白浓度计算

亚硝酸含量（μmol/mgprot）=(A样本-A空白）÷[(A标准-A空白)÷C标准]×V样本÷(Cpr×V样本)=0.04×[(A样本-A空白）÷(A标准-A空白)]÷Cpr

V总：加入提取液体积，3mL；V样本：反应中样品体积，0.5mL；C标准：标准溶液浓度，0.04μmol/mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样品质量，g。

注意事项：

1、试剂盒2-8℃保存。

2、试剂对人体有一定的危害，请穿实验服，戴手套操作。

3、若检测出得OD值在标准曲线范围外，请将样品进行适当的浓缩或稀释（A540<0.03浓缩，A540>1.5适当稀释）。