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产品名称:类黄酮糖基转移酶(UFGT)测试盒

产品规格:50管/48样,100管/96样

产品货号:LE-1-190,LE-2-190

产品报价:

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货号

产品名称

检测方法

规格

售价(元)

LE-1-190

类黄酮糖基转移酶(UFGT)测试盒

紫外分光光度法

50/48

3200

LE-2-190

类黄酮糖基转移酶(UFGT)测试盒

微量法

100管/96

5900

类黄酮糖基转移酶(UFGT试剂盒说明书(紫外分光光度法

测定意义:

花色苷是一类易溶于极性溶剂的天然色素,属黄酮类化合物。花色苷广泛存在于植物的根、茎、叶、花和果实中,使其呈现由红到紫等不同颜色,是植物主要的呈色物质。 

类黄酮糖基转移酶(UDP-glycose flavonoid glycosyltransferase, UFGT)是花色苷合成过程的最后一个酶,可以把不稳定的花色素催化成花色苷,在一定范围内,UFGT活性与花色素苷的合成呈现正相关。

测定原理:

UFGT 催化UDPG 与槲皮素生成 UDP;UDP 在丙酮酸激酶与乳酸脱氢酶作用下,氧化 NADH NAD+,NAD+生成速度与 UDP 含量成正比,通过 340nm 吸光度下降速度反映 UFGT 活性。

需自备的仪器和用品:

紫外分光光度计、水浴锅、可调式移液器、1mL 石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。

试剂的组成和配制:

提取液:液体 60mL×1 瓶,4℃保存;

试剂一:粉剂×1 瓶,-20℃避光保存;临用前加入 10mL 试剂四溶解。

试剂二:粉剂×1 瓶,-20℃保存;

试剂三:液体 100μL×1 管,4℃避光保存; 试剂四:液体 70mL×1 瓶,4℃保存;

样品测定的准备:

按照组织质量(g):提取液体积(mL) 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL

提取液),冰浴中匀浆。10000g ,4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。

测定步骤

1、在EP 管中加入如下试剂

试剂名称(μL

测定管

样本

20

试剂一

180

混匀,30℃反应 4h,95℃水浴 5min 灭活,冷却至室温。10000g 4℃离心 5min,取反应液待测。

2、工作液配制:在试剂二中加入 50mL 试剂四溶解,再加入 50μL 试剂三,混匀待用。用不完的工作液分装后-20℃保存一个月,禁止反复冻融。

3、在 1mL 石英比色皿中加入如下试剂

反应液

100

工作液

900

混匀,测定 340nm 1min 时吸光值 A1 6min 时吸光值 A2,ΔA=A1-A2。

UFGT 活力计算:

1、按照蛋白浓度计算

单位的定义:每 mg 组织蛋白每分钟催化 1nmol NADH 定义为一个酶活力单位。

UFGT 活力(nmol/min/mg prot)=ΔA×V 反总÷(ε×d)×109÷(V 样×Cpr)÷T×2

=67×ΔA ÷Cpr

2、按样本鲜重计算

单位的定义:每 g 组织每分钟催化 1nmol NADH 定义为一个酶活力单位。

UFGT 活力(nmol/min/g  鲜重)=ΔA×V 反总÷(ε×d)×109÷(W× V 样÷V 样总)÷T×2

=67×ΔA÷W

V 反总:反应体系总体积,1mL;ε:NADPH 摩尔消光系数,6.22×103 L / mol /cm;d:比色皿光径,1cm;V 样:加入样本体积,0.02 mL;V 样总:加入提取液体积,1mL;T:反应时间,240 min;2,稀释倍数;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量;


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