欢迎来合肥莱尔生物科技有限公司!我们将为您提供周到的服务!销售热线:0551-66107970 15375214453
为更好查询产品,请搜索中英文简称,如丙二醛(MDA)试剂盒,搜索”丙二醛”或”MDA”
联系我们Contact us
公司名称:合肥莱尔生物科技有限公司
联系人:陈经理
固话:0551-66107970
手机:15375214453
地址:合肥市包河经济开发区花园大道17号

产品名称:吲哚乙酸氧化酶(IAAO)试剂盒

产品规格:50管/48样,100管/96样

产品货号:LE-1-389,LE-2-389

产品报价:

免费咨询:0551-66107970

发邮件给我们:737388448@qq.com

分享到:

 

货号

产品名称

检测方法

规格

售价(元)

LE-1-389

吲哚乙酸氧化酶(IAAO)测试盒

分光光度法

50/48

550

LE-2-389

吲哚乙酸氧化酶(IAAO)测试盒

微量法

100管/96

1000

吲哚乙酸氧化酶活性测定试剂盒说明书(分光光度法

货号:LE-1-389

正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。

测定意义:

吲哚乙酸(IAA)在吲哚乙酸氧化酶的作用下,被氧化破坏失去活性。植物体内吲哚乙酸氧化酶活力的大小,对调节体内吲哚乙酸的水平,起着重要的作用,而影响植物的生长。

测定原理:

在无机酸存在情况下,吲哚乙酸能与 FeCl3作用,生成红色螯合物,该物质在530nm 处有最大吸收峰,酶活力的大小可以其破坏吲哚乙酸的速度表示之。吲哚乙酸的含量可用比色法测定。

自备仪器和用品:

低温离心机、水浴锅、可调节移液器、可见分光光度计/酶标仪、1.5mL 离心管、微量玻璃 比色皿/96 孔板、和蒸馏水。

试剂组成和配制:

试剂一:液体 65mL×1 瓶,4℃保存。

试剂二:液体 5mL×1 瓶,4℃保存。

试剂三:液体 5mL×1 瓶,4℃保存。

试剂四:液体 10mL×1 瓶,4℃保存。

试剂五:液体 2mL×1 瓶,4℃避光保存。

试剂六:液体 50mL×1 瓶,4℃保存。临用前吸取 1mL 试剂五加入试剂六中混匀,待用,避光保存

粗酶液提取:

1组织:按照组织质量(g):试剂一体积(mL)为 1 5~ 10 的比例(建议称取约 0. 1g 组织,加入 1mL 试剂一)进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min ,取上清置冰上待测。

2细菌、真菌:按照细胞数量(104 个):试剂一体积(mL)为 500~ 1000:1 的比例(建议 500 万细胞加入 1mL 试剂一),冰浴超声波破碎细胞(功率 300w ,超声 3 秒,间隔 7 秒,总时间 3min);然后 8000g 4℃ ,离心 10min ,取上清置于冰上待测。

3血清等液体:直接测定。

测定操作:

1、分光光度计/酶标仪预热 30min ,调节波长到 530 nm ,蒸馏水调零。

2、试剂二、试剂三、试剂四置于 25℃(一般物种)或者 37℃(哺乳动物)水浴中保温 20min。

3、取 1.5mL EP 管若干,操作表如下:

 

标准管

测定管

试剂二 (μL)

40

40

试剂三 (μL)

40

40

试剂四 (μL)

80

80

样本上清液 (μL)

0

40

试剂一 (μL)

240

200

充分混匀后置于 30°恒温水浴中,保温反应 30min

试剂六 (μL)

800

800

充分混匀,置于 30℃黑暗水浴保温显色 30min 。取 1000μL 显色后呈红色的反应液于 1mL 比色皿中,用分光光度计测定 530nm  OD 值,标准管记为 A1 ,测定管记为 A2

注意:标准管只需做一次

IAA 氧化酶活性计算公式:

a.  使用微量石英比色皿测定的计算公式如下

IAA 标准曲线公式:y = 1.334x + 0.025  R2 = 0.998(x  IAA 浓度,mmol /L;y 为吸光值)

1、按蛋白浓度计算

酶活定义:从开始时加入的 IAA 量减去酶作用后残留的IAA 含量,即得被酶所催化的 IAA 含量。以每mg 酶蛋白在 1h 内分解破坏的吲哚乙酸量表示酶活力大小。

U (μmol/h/mg prot=[(A1-0.025)÷ 1.334-(A2-0.025)÷ 1.334]×V 样÷(V 样×Cpr÷T 

= 1.5×(A1-A2)÷Cpr

2、按样本鲜重计算

酶活定义: 以每 g 样本在 1h 内分解破坏的吲哚乙酸量表示酶活力大小。

U (μmol/h/g  鲜重)=[(A1-0.025)÷ 1.334-(A2-0.025)÷ 1.334]×V 样÷(V ÷V 样总×W)÷T

= 1.5×(A1-A2)÷W

3、按细胞数量计算

酶活定义: 以每 1 万个细胞在 1h 内分解破坏的吲哚乙酸量表示酶活力大小。

U (μmol/h/104 cell=[(A1-0.025)÷ 1.334-(A2-0.025)÷ 1.334]×V 样÷(V 样÷V 样总×W) ÷T 

= 1.5×(A1-A2)÷细胞数量

4、按液体体积计算

酶活定义: 以每mL 酶液在 1h 内分解破坏的吲哚乙酸量表示酶活力大小。

U (μmol/h/mL=[(A1-0.025)÷ 1.334-(A2-0.025)÷ 1.334] ×V 样÷(V 样÷V 样总) ÷T 

= 1.5×(A1-A2)

V 样总:上清液总体积,1mLV 样:加入反应体系中上清液体积,20μL=0.02 mL;Cpr: 上清液蛋白质浓度,mg/mLW:样品质量,g T :反应时间,0.5h。

注意事项:

最低检出限为 0.01μmol/mL。


 相关新闻:
全国统一客服电话:

0551-66107970

地址:合肥市包河经济开发区花园大道17号
合肥市双凤经济开发区金珠路合肥莱尔生物科技有限公司2楼1515室
联系人:陈经理
手机号码:15375214453
固定电话:0551-66107970
公司网址:www.laier-bio.com

版权所有 © 合肥莱尔生物科技有限公司  皖ICP备17006278号-2

在线客服
在线客服
用心服务 成就你我