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地址:合肥市包河经济开发区花园大道17号

产品名称:ABTS自由基清除能力测试盒

产品规格:50管/24样,100管/48样

产品货号:LE-1-178,LE-2-178

产品报价:

免费咨询:0551-66107970

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货号

产品名称

检测方法

规格

售价(元)

LE-1-178

ABTS自由基清除能力测试盒

分光光度法

50/24

320

LE-2-178

ABTS自由基清除能力测试盒

微量法

100管/48

600

ABTS 自由基清除能力检测试剂盒说明书(分光光度法

货号:LE-1-178

产品内容: 使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致, 有疑问请及时联系工作人员。

试剂名称

规格

保存条件

提取液

液体 60 mL×1 

4℃保存

试剂一

液体 80 mL×1 

4℃保存

试剂二

粉剂×1 

4℃保存

试剂三

液体 20 μL×1 

4℃保存

试剂四

液体 1.5 mL×1 

-20℃保存

试剂五

粉剂×1 

4℃保存

溶液的配制:

1、 试剂二:临用前加入 3 mL 蒸馏水,充分溶解;用不完的试剂可分装-20℃保存, -20℃可保存两周;

2、 试剂三工作液的配制: 液体置于棕色试剂瓶中 EP 管内, 临用前根据样本量按试剂三(μL):蒸馏水(mL)=1 μL:12 mL 的比例配成试剂三工作液,现用现配,用不完的试剂放于 4℃保存;

3、 试剂四工作液的配制: 可先将试剂四-20℃分装保存。 临用前根据样本量按试剂四: 试剂一(V:V)=1:9 的比例配成试剂四工作液,现配现用。

4、 试剂五:粉剂置于试剂瓶内 EP 管中,含有 5 mg 维生素 C。临用前加入 2.8 mL 提取液,充分振荡溶解; 配成 10 mmol/L 维生素 C 溶液,用于阳性对照。 4℃可保存一周。

5 、 ABTS 工作液的配制: 临用前根据样本量按试剂一: 试剂二: 试剂三工作液(V:V:V)=76:5:4 的比例配成 ABTS 工作液,现用现配,室温避光保存, 务必在 30 分钟内使用。

产品说明:

ABTS 法可用于亲水性和亲脂性物质抗氧化能力测定, 是使用最广泛的间接检测方法。 ABTS 经氧化后生成稳 定的蓝绿色阳离子 ABTS 自由基, 在 405 nm 或 734 nm 处有最大吸收峰。被测物质加入 ABTS 自由基溶液后, 所 含抗氧化成分能与 ABTS 自由基发生反应而使反应体系褪色, 405 nm 的吸光度下降, 在一定范围内其吸光度的变 化与自由基被清除的程度成正比。本试剂盒中, 通过测定吸光度下降的程度来反映样本清除 ABTS 自由基的能力。

注意: 实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者 增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品:

恒温水浴锅、可见分光光度计、 1 mL 玻璃比色皿、台式离心机、研钵/粉碎机、烘干箱、 30~50 目筛和蒸馏水。

操作步骤:

一、样本处理(可适当调整待测样本量, 具体比例可以参考文献)

1、植物组织样本的制备: 将新鲜样品置于 60℃烘箱烘干至恒重,研钵研碎(或粉碎机粉碎),过 30~50 目筛; 称取约 0.05 g 样本, 加入 1 mL 提取液后置于 40℃水浴锅中浸提 30 min;10000 rpm  室温离心 10 min,取上清,  置于冰上待测。

2、红酒、果汁等液体样本:吸取 100 μL 样本溶液加入900 μL 提取液,旋涡振荡混匀,室温 10000 rpm 离心 10 min, 取上清,置冰上待测。

3、提取物或者药物:可用提取液配制成一定浓度,如 5 mg/mL。

注意:不同样本清除 ABTS 自由基的能力可能相差很大, 为保证实验结果的准确性, 样本要根据预实验结果 进行适当调整(如清除率大于 90%,建议将提取的样本用提取液进行稀释; 清除率小于 5%,建议加大烘干样本 质量或液体样本体积进行提取)。

二、测定步骤

1.  分光光度计预热 30 min 以上,调节波长至 405 nm,蒸馏水调零。

2.  阳性对照的准备: 若需要线性关系, 建议将 10 mmol/L 的维生素 C 溶液用提取液配制成 1、0.8、0.6、0.4、0.2、0.1 mg/mL 的维生素 C 溶液待用; 若需要清除率约为 90%的阳性对照,则建议将 10 mmol/L 维生素 C 溶液用提取 液配制成大于 1.5 mmol/L 的维生素 C 溶液待用。

3.  操作表:在 EP 管中分别加入下列试剂:

试剂名称(μL)

空白管

测定管

对照管

阳性对照管

上清液

 

50

50

 

不同浓度的VC溶液

 

 

 

50

50

 

 

 

试剂四工作液

100

100

 

100

ABTS 工作液

850

850

 

850

试剂一

 

 

950

 

充分混匀后室温避光静置 6 min。测定 405 nm 处的吸光度。空白管、对照管、标准管和测定管的 吸光值分别记为 A 空白、 A 对照、 A 阳性对照和 A 测定。空白管只需测 1-2 次。

三、 ABTS 自由基清除率的计算

1.    标准曲线的建立:

阳性对照的自由基清除率计算公式:

ABTS 自由基清除率 DVC%=[(A 空白-A 阳性对照)÷A 空白]×100%

2.    样本的自由基清除率计算公式:

ABTS 自由基清除率D% =[A 空白-(A 测定-A 对照)]÷A 空白×100%。

注意事项:

1、不同样本清除 ABTS 自由基的能力可能相差很大, 如果要比较不同样品的 ABTS 自由基清除能力, 建议对于同 一批样品加入等量的样品, 红酒、组织匀浆、果汁等液体样品加入同样体积, 提取物(或者药物) 配制成同样浓度。 在比较时,将样本根据预实验结果进行适当调整,比较同样浓度(相同稀释倍数)的清除率大小。

2、样品建议当天提取当天检测。


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