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公司名称:合肥莱尔生物科技有限公司
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地址:合肥市包河经济开发区花园大道17号

产品名称:甲基柠檬酸合酶(MCS)测试盒

产品规格:10管/9样,25管/24样,50管/48样,100管/96样

产品货号:LE-1-227,LE-2-227,LE-3-227,LE-4-227

产品报价:

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货号

产品名称

检测方法

规格

售价(元)

LE-1-227

甲基柠檬酸合酶(MCS)测试盒

可见分光光度法

10管/9样

1000

LE-2-227

甲基柠檬酸合酶(MCS)测试盒

可见分光光度法

25管/24样

1800

LE-3-227

甲基柠檬酸合酶(MCS)测试盒

可见分光光度法

50管/49样

3000

LE-4-227

甲基柠檬酸合酶(MCS)测试盒

微量法

100管/96样

4000

甲基柠檬酸合酶(MCS)试剂盒说明书(可见分光光度法

测定意义:

MCS 广泛存在于动物 、植物 、微生物和培养细胞的线粒体基质中,与柠檬酸合酶( CS)共同参与三 羧酸循环的调节。

测定原理:

MCS 催化丙酰 CoA 和草酰乙酸产生甲基柠檬酰辅酶 A ,进一步水解产生甲基柠檬酸;该反应促使无 色的 DTNB 转变成黄色的 TNB,在 412nm 处有特征吸光值。

自备仪器和用品:

可见分光光度计 、 台式离心机 、水浴锅 、可调式移液器 、 1ml 玻璃比色皿 、研钵 、冰 、无水乙醇和蒸 馏水

试剂盒组成:

产品名称

10/9

25/24

50/48

Storage

试剂一 :液体

10ml

25ml

50ml

-20℃

试剂二:液体

2ml

5ml

10ml

-20℃

试剂三:液体

0.2ml

0.5ml

1ml

-20℃

试剂四:液体

10ml

25ml

50ml

4℃

试剂五:粉剂

1 

1 

2 

4℃

试剂六:粉剂

1 

2 

4 

-20℃

试剂七:粉剂

1 

1 

2 

-20℃

说明书

一份

10管/9样:

试剂五:粉剂×1 支,4℃保存,临用前加入 320μl 无水乙醇;用不完的试剂分装后-20℃保 存 ,禁止反复冻融;

试剂六:粉剂×1 支 ,-20℃保存,临用前加入 320μl 蒸馏水;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻 融;

试剂七:粉剂×1 支 ,-20℃保存,临用前加入 320μl 蒸馏水;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻 融;

25管/24样:

试剂五:粉剂×1 支 ,4℃保存,临用前加入 800μl 无水乙醇;用不完的试剂分装后-20℃ 保存,禁止反复冻融。

试剂六:粉剂×2 支 ,-20℃保存,临用前加入 400μl 蒸馏水;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻 融。

试剂七:粉剂×1 支 ,-20℃保存,临用前加入 800μl 蒸馏水;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻 融。

50管/48样:

试剂五:粉剂×2 支,4℃保存,临用前加入 800μl 无水乙醇;用不完的试剂分装后-20℃ 保存,禁止反复冻融。

试剂六:粉剂×4 支,-20℃保存,临用前加入 400μl 蒸馏水;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻 融。

试剂七:粉剂×2 支 ,-20℃保存,临用前加入 800μl 蒸馏水;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻 融。

组织 、细菌或细胞中胞浆蛋白与线粒体蛋白的分离:

1、称取约 0. 1g 组织或收集 500 万细胞,加入 1ml 试剂一和 10μl  试剂三,用冰浴匀浆器或研钵匀浆。

2、将匀浆 600g ,4℃离心 5min。

3、弃沉淀,将上清液移至另一离心管中,11000g ,4℃离心 10min。

4、上清液即胞浆提取物,可用于测定从线粒体泄漏的 CS(此步可选做)。

5、在步骤④中的沉淀中加入 200μl 试剂二和 2μl  试剂三,超声波破碎(冰浴,功率 20%或 200W ,超声 3 秒, 间隔 10 秒,重复 30 次),用于线粒体 CS 测定。

测定步骤:

、分光光度计预热 30min 以上,调节波长至 412nm,蒸馏水调零。

、将试剂四 、五 、六和七在 37℃(哺乳动物)或 25℃(其它物种)孵育 5min

3 、样本测定

试剂名称  ( μl

测定管

试剂四

780

试剂五

30

试剂六

30

样本

30

试剂七

30

将上述试剂按顺序加入 1 ml 玻璃比色皿中,加试剂七的同时开始计时,在 412nm 波长下记录 20 秒时的初 始吸光度 A1 和反应 2min 后的吸光值 A2,计算ΔA=A2-A1。

MCS 活性计算:

1、按样本蛋白浓度计算:

单位的定义:每 mg 组织蛋白每分钟催化产生 1 nmol TNB 定义为一个酶活力单位。

MCSnmol/min/mg prot)=[ΔA×V 反总÷  (ε×d×109]÷(V ×Cpr) ÷T= 1100×ΔA÷Cpr

此法需要自行测定样本蛋白质浓度。

2、按样本鲜重计算:

单位的定义:每 g 组织每分钟催化产生 1 nmol TNB 定义为一个酶活力单位。

MCS(nmol/min/g  鲜重)=[ΔA×V 反总÷   (ε×d)×109]÷(W× V 样÷V 样总)÷T=222.2×ΔA÷W 

3、按细菌或细胞密度计算:

单位的定义:每 1 万个细菌或细胞每分钟催化产生 1 nmol TNB 定义为一个酶活力单位。

MCSnmol/min/104 cell=[ΔA×V 反总÷   (ε×d×109 500×V ÷V 样总)÷T=0.4444×ΔA

V 反总:反应体系总体积,9×10-4  L;ε:TNB 摩尔消光系数,1.36×104  L / mol /cm;d:比色皿光径,1cm; V 样:加入样本体积,0.03 ml;V 样总:加入提取液体积,0.202 ml;T:反应时间,2 min;Cpr:样本蛋  白质浓度,mg/ml;W:样本质量,g;500:细胞或细菌总数,500 万。


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