产品名称：超氧化物歧化酶(SOD)测试盒(WST-8法)
产品规格：50管/48样,100管/96样
产品货号：LE-1-062,LE-2-062
产品报价：
免费咨询：0551-66107970
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货号 |
产品名称 |
检测方法 |
规格 |
售价（元） |
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LE-1-062 |
超氧化物歧化酶(SOD)测试盒(WST-8法) |
分光光度法 |
50管/48样 |
400 |
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LE-2-062 |
超氧化物歧化酶(SOD)测试盒(WST-8法) |
微量法 |
100管/96样 |
720 |
超氧化物歧化酶（SOD）试剂盒说明书(分光光度法)
货号：LE-1-062
正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定
测定意义：
SOD（EC 1.15.1.1）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，催化超氧化物阴离子发生岐化作用，生成 H2O2 和 O2 。SOD 不仅是超氧化物阴离子清除酶，也是 H2O2 主要生成酶，在生物抗氧化系统中具有重要作用。
测定原理：
通过黄嘌呤及黄嘌呤氧化酶反应系统产生超氧阴离子(O2-.)，O2-.可与 WST-8 反应产生水溶性 染料甲臜，后者在 450nm 处有吸收；SOD 可清除 O2-.，从而抑制了甲臜的形成；反应液黄色越深，说明 SOD 活性愈低，反之活性越高。
需自备的仪器和用品：
分光光度计、离心机、移液器、1mL 玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水
试剂的组成和配制：
提取液：液体 60mL×1 瓶，4℃保存；
试剂一：液体 50mL×1 瓶，4℃避光保存；
试剂二：液体 300μL×1 支，4℃避光保存；
试剂三：液体 100μL×1 支，4℃保存；
试剂四：粉剂×2 瓶，4℃保存。
粗酶液提取：
1、细菌、细胞或组织样品的制备：
细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104 个）：提取液体积（mL）为 500~1000 ：1 的比例（建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 提 取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）； 8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1 ：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织， 加入 1mL 提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
2、血清（浆）样品：直接检测。
测定步骤：
1、分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 450nm ，蒸馏水调零。
2、试剂三的稀释：将试剂三用蒸馏水稀释 50 倍，用多少配多少。（试剂三和蒸馏水 1 ：49 稀释。
3、工作液配制：在试剂一加入 250μL 试剂二，充分混匀。配好的试剂 4℃避光可保存一周。（若一次性测定样本较少，可按照实际用量将试剂一和试剂二按照 20mL ：0.1mL 的比 例混匀配制）
4、将一瓶试剂四用 5mL 蒸馏水溶解（溶解后一周内用完）。
5、 样本测定（在 1mL 玻璃比色皿中依次加入下列试剂）
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试剂名称(μL） |
测定管 |
对照管 |
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样本 |
50 |
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蒸馏水 |
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50 |
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试剂三（稀释后） |
50 |
50 |
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工作液 |
800 |
800 |
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试剂四 |
100 |
100 |
注意事项：
1、试剂三为酶，不可冷冻，使用时在冰上放置。
2、对照管只需要做一管。
3、SOD 为什么有的样本测定管大于对照管，对照管数值在什么范围？
对照管的范围是 0.8-2。对照管吸光值过低可能是
（1）试剂三活性低，可以适当减少稀 释倍数；
（2）没有按顺序加试剂；
（3）反应时间不够，可以延长反应时间（反应时间 30min 可以延长到 40min）。
（4）对照管吸光值过高可能是试剂三未按操作说明书稀释相应倍数。
（5）若出现测定管大于对照管，可能是样本中杂质的影响太大，为了降低杂质的影响一般将样本提取上清液用蒸馏水或提取液稀释 10 倍后再测，通常可以使测定正常。计算公式中乘以相应稀释倍数。
SOD 活性计算：
1、抑制百分率的计算
抑制百分率＝(A 对照管－A 测定管) ÷A 对照管×100%
尽量使样本的抑制百分率在 10-90%范围内。如果计算出来的抑制百分率小于 10%或大于 90%，则通常需要调整加样量后重新测定。如果测定出来的抑制百分率偏高，则需将样本用 提取液适当稀释；如果测定出来的抑制百分率偏低，则需重新准备浓度比较高的待测样本。
2 、SOD 酶活性单位：在上述黄嘌呤氧化酶藕联反应体系中抑制百分率为 50%时，反应体系 中的 SOD 酶活力定义为一个酶活力单位(U/mL)。
3、SOD 酶活性计算：
（1）血清（浆）SOD 活性(U/mL)=[抑制百分率÷(1－抑制百分率)×V 反总]÷V 样
=20×抑制百分率÷(1－抑制百分率)
（2）组织、细菌或培养细胞 SOD 活力计算：
a. 按样本蛋白浓度计算
SOD 活性(U/mg prot)=[抑制百分率÷(1－抑制百分率)×V 反总]÷(V 样×Cpr)
=20×抑制百分率÷(1－抑制百分率)÷Cpr
需要另外测定，建议使用本公司 BCA 蛋白质含量测定试剂盒。
b. 按样本鲜重计算
SOD 活性(U/g 鲜重)=[抑制百分率÷(1－抑制百分率)×V 反总]÷(W ×V 样÷V 样总)
=20×抑制百分率÷(1－抑制百分率)÷W
c. 按细菌或细胞个数计算
SOD 活力(U/104 cell)=[抑制百分率÷(1－抑制百分率) ×V 反总]÷(500×V 样÷V 样总) =0.04×抑制百分率÷(1－抑制百分率)
V 反总：反应体系总体积，1mL；V 样：加入反应体系中样本体积，0.05mL；V 样总：加入 提取液体积，1 mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL ；W：样本质量，g；500：细胞或细菌 总数，500 万。
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