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产品名称:超氧化物歧化酶(SOD)试剂盒

产品规格:50管/48样,100管/96样

产品货号:YX-C-A500,YX-C-A500

产品报价:

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货号

产品名称

检测方法

规格

售价(元)

YX-C-A500

超氧化物歧化酶(SOD)测试盒

可见分光光度法

50/48

380

YX-W-A500

超氧化物歧化酶(SOD)测试盒

微量法

100管/96

750

超氧化物歧化酶(SOD)活性检测试剂盒说明书(微量法

注意:正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。
货号:YX-W-A500
规格:100T/96S
产品内容:
试剂一:液体 20mL×1 瓶,4℃避光保存;
试剂二:粉剂 ×1 支,4℃避光保存;临用前使用20ml试剂一充分溶解,配好的试剂 4℃避光可保存一周。
试剂三:液体 110μL×1 支,4℃保存;临用前将试剂三用蒸馏水稀释 10 倍,用多少配多少。
试剂四:液体 2.5mL×1 瓶,-20℃保存。
试验中所需的仪器和试剂:
可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、可调式移液器、微量比色皿/96 孔板、研钵、冰和蒸馏

产品说明:
SOD(EC 1.15.1.1)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,催化超氧化物阴离子发生岐化作用,生成 H2O2 和 O2。SOD 不仅是超氧化物阴离子清除酶,也是 H2O2 主要生成酶,在生物抗氧化系统中具有重要作用。
通过黄嘌呤及黄嘌呤氧化酶反应系统产生超氧阴离子(O2-.),O2-.可与 WST-8 反应产生水溶性染料甲臜,后者在 450nm 处有吸收;SOD 可清除 O2-.,从而抑制了甲臜的形成;反应液黄色越深,说明 SOD 活性愈低,反之活性越高。
操作步骤:
一、样品的前处理:
(1) 细菌、细胞或组织样品的制备:
先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清,按照每 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液(生理盐水或者PBS),超声波破碎(功率 20%或 200w,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次)。8000g 4℃离心 10 分钟,取上清, 置冰上待测。
称取约 0.1g 组织,加入 1mL 提取液(生理盐水或者PBS)进行冰浴匀浆; 8000g 4℃离心 10 分钟,取上清,置冰上待测。
(2) 血清(浆)样品:直接检测
二、测定操作表:
1. 分光光度计/酶标仪预热 30min 以上,调节波长至 450nm,蒸馏水调零。
2. 测定前将试剂一、二和四 37℃水浴 5min 以上。
3. 样本测定(按顺序加入下列试剂)

试剂名称(μL)

测定管

对照管 1

对照管 2

对照管 3

样本

10

 

 

 

蒸馏水

 

10

10

10

试剂三(稀释后)

10

10

10

10

试剂四

20

20

20

20

试剂二

160

160

160

160

充分混匀,室温静置 30min 后,450nm 处测定各管吸光值 A。
注意事项:
1、试剂三为酶,不可冷冻,使用时在冰上放置。
2、对照管只需要做三管,求平均值。
3、SOD 为什么有的样本测定管大于对照管,对照管数值在什么范围?对照管的范围是 0.4-1。对照管吸光值过低可能是:
(1)试剂三活性低,可以适当减少稀释倍数;
(2)没有按顺序加试剂;
(3)反应时间不够,可以延长反应时间(反应时间可以延长到 40min)。
(4)对照管吸光值过高可能是试剂三未按操作说明书稀释相应倍数。
(5)可能是样本中杂质的影响太大,为了降低杂质的影响一般,将样本提取上清液用蒸馏水或提取液稀释 10 倍后再测,通常可以使测定正常。计算公式中乘以相应稀释倍数。
SOD 活性计算:
1、抑制百分率的计算
抑制百分率=(A 对照管-A 测定管) ÷A 对照管× 100%
尽量使样本的抑制百分率在 10-90%范围内。如果计算出来的抑制百分率小于 10%或大于90%,则通常需要调整加样量后重新测定。如果测定出来的抑制百分率偏高,则需将样本用提取液适当稀释;如果测定出来的抑制百分率偏低,则需重新准备浓度比较高的待测样本。
2、SOD 酶活性单位:在上述黄嘌呤氧化酶藕联反应体系中抑制百分率为 50%时,反应体系中的 SOD 酶活力定义为一个酶活力单位(U/mL)。
3、SOD 酶活性计算:
血清(浆)SOD 活性(U/mL)=[抑制百分率÷(1 -抑制百分率)×V 反总]÷V 样
=20×抑制百分率÷(1 -抑制百分率)
组织、细菌或培养细胞 SOD 活力计算:
按样本蛋白浓度计算
SOD 活性(U/mg prot)=[抑制百分率÷(1 -抑制百分率)×V 反总]÷(V 样×Cpr )
=20×抑制百分率÷(1 -抑制百分率)÷Cpr
需要另外测定,建议使用合肥莱尔生物科技有限公司BCA 蛋白质含量测定试剂盒。
 
按样本鲜重计算
SOD 活性(U/g 鲜重)=[抑制百分率÷(1 -抑制百分率)×V 反总]÷(W ×V 样÷V 样总)
=20×抑制百分率÷(1 -抑制百分率)÷W 
c.按细菌或细胞个数计算
SOD 活力(U/104 cell)=[抑制百分率÷(1 -抑制百分率) ×V 反总]÷(500×V 样÷V 样总)
=0.04×抑制百分率÷(1 -抑制百分率)
 
V 反总:反应体系总体积,0.2mL;
V 样:加入反应体系中样本体积,0.01mL;
V 样总: 加入提取液体积,1 mL;
Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL ;
W:样本质量,g;500:细胞或细菌总数,500 万

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