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产品名称:超氧化物歧化酶(SOD)测试盒

产品规格:50管/48样,100管/96样

产品货号:LE-1-158,LE-2-158

产品报价:

免费咨询:0551-66107970

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货号

产品名称

检测方法

规格

售价(元)

LE-1-158

超氧化物歧化酶(SOD)测试盒

可见分光光度法

50/48

380

LE-2-158

超氧化物歧化酶(SOD)测试盒

微量法

100管/96

750

超氧化物歧化酶(SOD)活性检测试剂盒说明书(可见分光光度法

产品内容:

提取液:液体 60 mL×1 瓶,4℃保存;

试剂一:液体 30 mL×1 瓶,4℃保存;

试剂二:粉剂×1 瓶,4℃保存,用时加 54mL 蒸馏水配制成悬浊液,使用前充分摇匀;

试剂三:液体 320μL×1 支,4℃保存;

试剂四:液体 22 mL×1 瓶,4℃保存。

试验中所需的仪器和试剂:

可见分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1ml玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。

产品说明:

SOD(EC 1.15.1.1)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,催化超氧化物阴离子发生岐化作用,生成 H2O2  O2。SOD 不仅是超氧化物阴离子清除酶,也是 H2O2 主要生成酶,在生物抗氧化系统中具有重要作用。

通过黄嘌呤及黄嘌呤氧化酶反应系统产生超氧阴离子(O2-),O2-可还原氮蓝四唑生成蓝色甲臜, 后者在 560nm 处有吸收;SOD 可清除 O2-,从而抑制了甲臜的形成;反应液蓝色越深,说明 SOD 活性愈低,反之活性越高。莱尔生物创造性的设置SOD对照管,消除了样本颜色对实验的干扰。

操作步骤:

一、样品的前处理:

1、细菌或培养细胞:收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清,按照细菌或细胞数量(104):提取液体积(mL)为500-1000:1的比例(建议500万细菌或细胞加入1mL提取液),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率20%或200W,超声3s,间隔10s,重复30次),8000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。

2、组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5-10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液),进行冰浴匀浆;8000g4℃离心10min,取上清,置冰上待测。

3、血清(浆) 样品:直接检测。

二、测定步骤:

(1)分光光度计预热30min 以上,调节波长至560nm,蒸馏水调零。

(2)测定前将试剂一、二和四37℃(哺乳动物)或25℃(其它物种)水浴5min 以上。

(3)样本测定(在EP管中加入下列试剂)

 

测定管

对照管

空白管 1

空白管 2

试剂一(μL)

240

240

240

240

试剂二(μL)

510

510

510

510

试剂四(μL)

180

180

180

180

μL)

90

90

 

 

蒸馏水μL)

 

6

90

96

试剂三(μL)

6

 

6

 

充分混匀,室温静置30min后,加入1mL玻璃比色皿,560nm处测定各管吸光值A。ΔA测定=A测定-A对照,△A空白=A空1-A空2。

注意:

1、试剂二为悬浊液,注意混匀后加入。试剂三为酶,不可冷冻,使用时在冰上放置。

2、样本较多时,可按表格配置工作液(包含试剂一、二、四),试剂三必须最后加入。

3、空白管1和空白管2各只需做1~2管;每个样本有一个对照管。

4、反应完成后,可能有沉淀生成,混匀后测定即可。

三、SOD活性计算:

1、 抑制百分率的计算

抑制百分率=(△A空白一ΔA测定)÷ΔA空白x100%

尽量使样品的抑制百分率在30-70%范围内,越靠近50%越准确。如果计算出来的抑制百分率小于30%或大于70%,则通常需要调整加样量后重新测定。如果测定出来的抑制百分率偏高,则需适当稀释样品;如果测定出来的抑制百分率偏低,则需重新准备浓度比较高的待测样品。

2、SOD 酶活性单位:

在上述黄嘌呤氧化酶藕联反应体系中抑制百分率为50%时,反应体系中的 SOD 酶活力定义为一个酶活力单位。

3、SOD 酶活性计算:

(1) 血清(浆)SOD 活性(U/mL)=[抑制百分率÷(1一抑制百分率)xV 反总]÷V样x样本稀释倍数

=11.4x抑制百分率÷(1一抑制百分率)x样本稀释倍数

(2)组织、细菌或培养细胞SOD活力计算:

A按样本蛋白浓度计算

SOD 活性(U/mg prot)=[抑制百分率÷(1一抑制百分率)xV 反总] ÷ (V样xCpr) x样本稀释倍数

=11.4x抑制百分率÷(1一抑制百分率)÷Cprx样本稀释倍数

B按样本鲜重计算

SOD 活性(U/g鲜重)=[抑制百分率÷(1一抑制百分率)xV 反总] ÷(WxV 样÷V样总)x样本稀释倍数

=11.4x抑制百分率÷(1一抑制百分率)÷Wx样本稀释倍数

C按细菌或细胞个数计算

SOD 活力(U/104cell)=[抑制百分率÷(1一抑制百分率)xV 反总]÷(500xV 样÷V样总)x样本稀释倍数

=0.0228x抑制百分率÷(1一抑制百分率)x样本稀释倍数

V反总:反应体系总体积,1.026mL;V样:加入反应体系中样本的体积,0.09mL;V样总:加入提取液体积,1mL;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样品质量,g;500:细胞或细菌总数,500万。


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