产品简介：

通过黄嘌呤及黄嘌呤氧化酶反应系统产生超氧阴离子(O2-.)，O2-.可还原氮蓝四唑生成蓝色甲臜，后者在560nm处有吸收；SOD可清除O2-.，从而抑制了甲臜的形成；反应液蓝色越深，说明SOD活性愈低，反之活性越高。

试验中所需的仪器和试剂：

分光光度计/酶标仪、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色/96孔板、研钵、冰和蒸馏水

产品内容：

提取液：100mL×1瓶，4℃保存。

试剂一：5 mL×1瓶，4℃保存；   

试剂二：粉剂×1瓶，4℃保存，用时加12mL双蒸水，充分混匀，现配现用。

试剂三：液体100μL×1支，4℃保存。（临用前100μL双蒸水，充分混匀；）

试剂四：液体4mL×1瓶，4℃保存；

操作步骤：

一、样品的前处理：   

(1) 细菌、细胞或组织样品的制备：

   先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清，按照每500万细菌或细胞加入1mL提取液，超声波破碎（功率20%或200w。超声3秒，间隔10秒。重复30次）。8000g 4℃离心10分钟，取上清，置冰上待测。 

称取约0.1g组织，加入1mL提取液进行冰浴匀浆； 8000g 4℃离心10分钟，取上清，置冰上待测。

(2) 血清(浆)样品：直接检测

二、测定操作表：

1， 测定前将试剂一、二和四室温放置，使试剂的温度不低于室温后再测定。

2， 试剂三为酶，不可冷冻，使用时在冰上放置。

3， 对照管只需要做一管。 

SOD活性计算：

1、抑制百分率的计算

抑制百分率＝( A 对照管－A 测定管) ÷A 对照管 × 100%

尽量使样品的抑制百分率在30-70%范围内。如果计算出来的抑制百分率小于30% 或大于70% ，则通常需要调整加样量后重新测定。如果测定出来的抑制百分率偏高，则需适当稀释样品；如果测定出来的抑制百分率偏低，则需重新准备浓度比较高的待测样品。

2、SOD酶活性单位：在上述黄嘌呤氧化酶藕联反应体系中抑制百分率为50% 时，反应体系中的SOD酶活力定义为一个酶活力单位。   

3、SOD酶活性计算：

（1）血清（浆）SOD活性（U/ml）=[抑制百分率÷( 1－抑制百分率)×V反总] ÷V样×样本稀释倍数=11.11×抑制百分率÷( 1－抑制百分率) ×样本稀释倍数

（2）组织、细菌或培养细胞SOD活力计算：

a，按样本蛋白浓度计算

SOD活性（U/mg prot）=[抑制百分率÷( 1－抑制百分率)×V反总] ÷(V样×Cpr)×样本稀释倍数=11.11×抑制百分率÷( 1－抑制百分率) ÷Cpr×样本稀释倍数。 

b，按样本鲜重计算

SOD活性（U/g 鲜重） =[抑制百分率÷( 1－抑制百分率)×V反总] ÷(W×V样÷V样总)×样本稀释倍数=11.11×抑制百分率÷( 1－抑制百分率) ÷W×样本稀释倍数。

c，按细菌或细胞个数计算

SOD 活力（U/10⁴ cell）=[抑制百分率÷( 1－抑制百分率)×V反总] ÷(500×V样÷V样总)×样本稀释倍数=0.022×抑制百分率÷( 1－抑制百分率)×样本稀释倍数。

V反总：反应总体积，0.2ml；V样：加入反应体系中的样品体积，0.018ml；V样总：加入提取液体积1ml；Cpr：蛋白样本浓度，mg/ml; W:样本质量，g； 500：细胞或细菌总数，500万。