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产品名称:葡萄糖-6-磷酸(6PG)测试盒

产品规格:50管/24样,100管/48样

产品货号:LE-1-234,LE-2-234

产品报价:

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货号

产品名称

检测方法

规格

售价(元)

LE-1-234

葡萄糖-6-磷酸(6PG)测试盒

可见分光光度法

50/24

550

LE-2-234

葡萄糖-6-磷酸(6PG)测试盒

微量法

100管/48

1000

葡萄糖-6-磷酸(6PG)含量测定试剂盒说明书(可见分光光度法

测定意义:

6PG (Glucose-6-phosphate,葡萄糖-6-磷酸,又称 6-磷酸葡萄糖),是糖酵解和磷酸戊糖途径的中间产物,广泛存在于动植物体和微生物中。在糖酵解的第一步反应中,葡萄糖被己糖激酶催化生成葡萄糖-6-磷酸,然后通过磷酸葡萄糖异构酶的催化形成果糖-6-磷酸,以继续糖酵解的其它步骤;而在戊糖磷酸途径中,葡萄糖-6-磷酸是其第一个底物,该过程也是生成NADPH 的主要途径。此外,葡萄糖-6-磷酸也能转化形成糖原或淀粉而被储存起来。

测定原理:

6-磷酸葡萄糖脱氢酶可催化 6PG NADP+生成磷酸葡萄糖酸和 NADPH,NADPH 在1-mPMS 的作用下使 WST-8 显橙黄色,在 450 nm 下测定吸光值。

需自备的仪器和用品:

分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1mL 玻璃比色皿、研钵、冰、蒸馏水。

试剂的组成和配制:

提取液:液体 60 mL×1 瓶,4℃保存;

试剂一:液体 30mL×1 瓶, 4℃保存;

试剂二:粉剂×1 瓶,-20℃保存;

试剂三:液体 3mL×1 瓶, 4℃避光保存。

6PG 提取:

1、细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104 个):提取液体积(mL)为 500~1000:1 的比例(建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液),超声波破碎(冰浴,功率 20%或 200W,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次), 8000g, 25℃离心 10min,取上清待测。

2、组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL 提取液),进行冰浴匀浆,8000g,25℃离心 10min,取上清待测。

3、血清(浆)等液体样品:直接测定。

测定步骤:

1、分光光度计预热 30min 以上,调节波长至 450nm,蒸馏水调零。

2、试剂二的配制:临用前加入 8mL 水充分溶解待用,用不完的试剂分装后-20℃保存;

3、工作液的配制:临用前按照样本数量,按以下比例配制工作液

试剂名称(μL

测定工作液

对照工作液

试剂一

500

500

试剂二

250

 

      水

 

250

试剂三

50

50

4、样本测定

按下表在比色皿中加入如下试剂

试剂名称(μL

测定管

对照管

样本

250

250

测定工作液

750

 

对照工作液

 

750

37℃避光孵育 30min,450nm 下测定吸光值A 测定与A 对照,A=A 测定-A 对照。每个测定管需设一个对照管。

6PG 含量计算:

1、标准条件下测定回归方程为 y = 7.7178x -0.0016,R2=0.997;x 为 6PG 含量(μmol/mL),y 为吸光值。

2、按照血清(浆)体积计算

6PG 含量(nmol/mL)= [(△A+0.0016)÷7.7178×V1]÷×V1×1000

=129.6×(△A+0.0016)

3、按照蛋白浓度计算

6PG 含量(nmol/mg prot)= [(△A+0.0016)÷7.7178×V1]÷(V1×Cpr)×1000

=129.6×(△A+0.0016) ÷Cpr

4、按照样品质量计算

6PG 含量(nmol/g 鲜重)= [(△A+0.0016)÷7.7178×V1]÷(W ×V1÷V2)×1000

=129.6×(△A+0.0016) ÷W

5、按照细菌或细胞密度计算

6PG 含量(nmol/104 cell)= [(△A+0.0016)÷7.7178×V1]÷(500×V1÷V2)×1000

=0.259×(△A+0.0016)

V1:加入反应体系中样本体积,0.25mL;V2:加入提取液体积,1 mL Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g;500:细菌或细胞总数,500 万;1000μmol  nmol 的换算系数。


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