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产品名称:总果胶含量测试盒

产品规格:50管/24样,100管/48样

产品货号:LE-1-318,LE-2-318

产品报价:

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货号

产品名称

检测方法

规格

售价(元)

LE-1-318

总果胶含量测试盒

光光度法

50管/24样

620

LE-2-318

果胶含量测试盒

微量法

100管/48样

1200

总果胶含量检测试剂盒说明书(分光光度法

货号:LE-1-318

正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。

产品内容:

提取液一:液体 110mL×1 瓶,4℃保存。

提取液二:液体 70mL×1 瓶,4℃保存。

试剂一:浓硫酸 60mL,自备。

试剂二:液体 3mL×1 瓶,4℃保存。

试剂三:液体 5mL×1 瓶,4℃避光保存。

标准品:粉剂×1 支,10mg  半乳糖醛酸,4℃保存。临用前加入 0.943mL 提取液二,配成 50μmol/mL的标准液

产品说明:

果胶是植物细胞壁主要组成成分之一,分为水溶性果胶和不溶性果胶,不溶性果胶为原果胶(碱溶性果胶)。果胶是一种天然高分子化合物,具有良好的胶凝化和乳化稳定作用,已广泛用于食品、医药、日化及纺织行业。

原果胶在稀酸中水解为可溶性果胶,与原有的可溶性果胶进一步转化为半乳糖醛酸,产物在强酸中与咔唑缩合生成紫红色化合物,在 530 nm 处有特征吸收峰。

试验中所需的仪器和试剂:

可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、浓硫酸、1mL 玻璃比色皿、可调式移液枪、研钵/匀浆器和蒸馏水。

操作步骤:

一、总果胶的提取:

将组织样品捣碎,按照样品质量(g)和提取液一体积(mL) 1: 20 的比列(建议取约 0.05g 样品, 加入 1mL 提取液一),置于 90℃恒温水浴锅中浸提 30min,取出冷却后于 5000g、25℃离心 10min,去掉上清,沉淀中再加入 1mL 提取液一重复操作一次,离心后去上清,沉淀中加入 1mL 提取液二, 置于 90℃恒温水浴锅中水解 1h,取出冷却后于 8000g、25℃离心 15min,取上清液待测。

二、测定步骤:

1、分光光度计预热 30min 以上,调节波长至 530nm,蒸馏水调零。

2、将 50μmol/mL 标准液用提取液二稀释为 1、0.5、0.25、0.125、0.0625、0.03125 μmol/mL 的标准溶液备用。

3、操作表:

试剂名称

空白管

标准管

对照管

测定管

样本(μL)

-

-

100

100

标准品(μL)

-

100

-

-

蒸馏水(μL)

100

-

-

-

试剂一(μL)

800

800

800

800

混匀、90℃放置 10min,取出后冷却

试剂二(μL)

-

-

100

-

试剂三(μL)

100

100

-

100

混匀,25℃静置 30min 后测定 530nm 处吸光值,分别记为 A 空白管、A 标准管、A 对照管和 A 测定管。△A 标准=A 标准管-A 空白管,△A 测定=A 测定管-A 对照管。

三、总果胶含量的计算

1、 标准曲线的绘制:

以各个标准溶液的浓度为 x 轴,其对应的△A 标准为 y 轴,绘制标准曲线,得到标准方程 y=kx+b, △A 测定带入方程得到 x(μmol/mL

2、 总果胶含量的计算:

总果胶含量(μmol /g  鲜重)= x×V 提取液二÷W =x÷W

V 提取液二:加入提取液二的体积,1mL;W:样本鲜重,g。

注意事项:

1 浓硫酸具有强腐蚀性,操作时需特别注意,90℃加热、冷却后再打开盖子,以防液体飞溅烧伤。

2 若吸光值超过 0.8,可将样本提取液二进行适当稀释再进行测定,并在计算公式中乘以稀释倍数。


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