注意：正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。

产品内容：

提取液： 60%乙醇， 自备，常温保存。

试剂一： 液体 5mL×1 瓶，4℃保存。

试剂二： 液体 4mL×1 瓶，4℃保存。

试剂三： 液体 30mL×1 瓶，4℃保存。

标准品： 液体 1mL×1 支，4℃保存。10mg/mL 单宁酸标准溶液。

产品说明：

类黄酮是一类多苯化合物，属于植物次生代谢物，对人体具有消炎，抗菌，降血脂，清除体内 羟自由基，预防癌症等作用。

在碱性亚硝酸盐溶液中，类黄酮与铝离子形成在 470nm 处有特征吸收峰的红色络合物，测定样 品提取液在 470nm 处的吸光值，即可计算样品类黄酮含量。

自备实验用品及仪器：

天平、烘箱、粉碎仪、筛子、超声破碎仪、60%乙醇、离心机、可见分光光度计、1mL 玻璃比 色皿、蒸馏水。

操作步骤：

一、类黄酮提取

将样本烘干至恒重，粉碎，过 40 目筛之后，称取约 0. 1g ，加入 1mL 提取液，用超声提取法进 行提取，超声功率 300W ，破碎 5s ，间歇 8s ，60℃， 提取 30min 。12000rpm ，25℃，离心 10min ， 取上清，用提取液定容至 1mL ，待测。

二、标准溶液准备

将 10mg/mL 单宁酸标准溶液进行二倍稀释至 1.25、0.625 、0.3125 、0. 156、0.078、0.039 、0.02、 0.01 、0.005mg/mL 备用。

三、测定操作表

1 、可见分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 470nm ，蒸馏水调零。

2 、操作表

四、类黄酮含量计算

1 、标准曲线绘制

以单宁酸浓度为横坐标，ΔAˊ为纵坐标绘制标准曲线 y=kx+b ，将ΔA带入方程求得x；

2 、按样本鲜重计算

类黄酮含量（mg/g 鲜重） = x×V 提取÷W=x÷W

3 、按样本蛋白浓度计算

类黄酮含量（mg/mg prot）= x×V 提取÷(Cpr×V 提取) = x÷Cpr

V 提取： 加入提取液体积； 1mL；W：样本鲜重，g；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL。

注意事项：

1 、OD 值大于 0.5 ，样品适当稀释再测定，注意计算公式里乘以稀释倍数。

2 、显色完成后立即测定，2 小时后吸光值会下降。