产品名称:单宁含量测试盒
产品规格:50管/48样,100管/96样
产品货号:LE-1-176,LE-2-176
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货号
产品名称
检测方法
规格
售价(元)
LE-1-176
单宁含量测试盒
分光光度法
50管/48样
500
LE-2-176
单宁含量测试盒
微量法
100管/96样
900
单宁含量试剂盒说明书(分光光度法)
货号:LE-1-176
正式测定前取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定
测定意义:
单宁是一类广泛存在于植物体内的多元酚化合物,又称植物多酚。具有独特的化学性质和多种生理活性, 如能与蛋白质、生物碱、多糖结合;能与多种金属离子发生络合或静电作用;具有止血、抑制微生物、抗 过敏、抗突变、抗肿瘤、抗衰老等生理活性。
测定原理:
单宁在碱性环境下与磷钼酸反应,生成蓝色化合物,在 760nm 处有最大吸收峰。
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计、水浴锅、可调式移液器、 1mL 玻璃比色皿、研钵和蒸馏水。
试剂的组成和配制:
试剂一:液体 10 mL× 1 瓶,4℃保存;
试剂二:液体 8 mL× 1 瓶,4℃保存;
单宁的提取:
按照组织质量(g):蒸馏水体积(mL)为 1: 5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL 蒸馏水), 充分 匀浆后转移到 EP 管中,80℃水浴提取 30min, 8000 g,25℃离心 10 min,取上清液待测。
测定步骤:
1、分光光度计预热 30min 以上,调节波长至 760nm,蒸馏水调零;试剂一和试剂二 37℃预热 10min 以上;
2、操作表:
试剂名称(µL)
对照管
测定管
样本
25
蒸馏水
675
650
试剂一
175
175
混匀,室温静置 5min
试剂二
150
150
混匀,室温静置 30min,760nm 处读取吸光值 A ,ΔA=A 测定-A 对照,对照管只要做一管。
单宁含量计算:
1、标准条件下测定的回归方程为 y = 1.6418x +0.0134;x 为标准品浓度(mg/mL) ,y 为ΔA(A 测定-A 对照)。
2、按样本鲜重计算:
单宁含量( mg /g 鲜重)= [(ΔA-0.0134) ÷1.6418×V1]÷(W×V1÷V2)
=0.609×(ΔA-0.0134) ÷W。
3、按样本蛋白浓度计算:
单宁含量(mg/mg prot)= [(ΔA-0.0134) ÷1.6418×V1]÷(V1×Cpr)
=0.609×(ΔA-0.0134) ÷Cpr。
V1 :加入样本体积,0.025mL;V2 :加入提取液体积, 1mL; Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本鲜重,g。
注意:
1、ΔA 控制在 0.02-0.8 范围内,若 ΔA 大于 0.8,将样本提取上清液用蒸馏水稀释 10 倍后检测,计算公式 中乘以相应稀释倍数。
2、标准曲线线性范围为:0.025mg/mL-0.5mg/mL。
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