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产品名称:单宁含量测试盒

产品规格:50管/48样,100管/96样

产品货号:LE-1-176,LE-2-176

产品报价:

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货号

产品名称

检测方法

规格

售价(元)

LE-1-176

单宁含量测试盒

紫外分光光度法

50/48

500

LE-2-176

单宁含量测试盒

微量法

100管/96

900

单宁含量检测试剂盒说明书(紫外分光光度法

产品内容:

提取液: 液体75mL×2瓶,4℃保存。

试剂一: 粉剂×1瓶,常温保存。

标准品: 粉剂×1支,10mg单宁酸,4℃保存。临用前加入1. 175mL提取液溶解为5000nmol/mL的 标准液。

产品说明:

单宁又称植物多酚,是一类广泛存在于植物体内的多元酚化合物。单宁可作为潜在的生物标记物; 与蛋白质结合的能力又称为收敛性或涩性。其收敛性是多种生理活性的基础,如止血、 抗肿瘤、 抗 衰老等生理活性,也是影响产品口感的因素之一。

根据光谱特性,单宁在275nm下有较强的紫外吸收,通过利用活性炭能够特异吸附单宁的性 质来检测单宁含量。

自备实验用品及仪器:

紫外分光光度计、离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL石英比色皿和蒸馏水。

测定操作:

1 、样本处理:

将样本烘干至恒重,粉碎,过40 目筛之后,称取约0.1g,加入2mL提取液,封口膜封口防止液 体溅出,于70℃水浴提取30min,期间可摇晃数次。12000rpm,25℃ ,离心10min,取上清,用提取 液定容至2mL,待测。

2 、操作步骤:

(1)紫外分光光度计预热30min ,波长调至275nm 。蒸馏水调零。

(2)将5000 nmol/mL标准液用提取液稀释为6.25 、3. 125 、1.5625 、0.78625 、0.4 、0.2nmol/mL标准 溶液。

(3)加样表:

试剂名称

测定管

对照管

标准管

空白管

试剂一

大约10-15mg

-

-

大约10-15mg

蒸馏水

-

-

-

1mL

标准溶液

-

-

1mL

-

样品

1mL

1mL

-

-

充分混匀震荡5min ,13000g  离心20min 。取上清液测定275nm下的吸光度,分别记为A测定管、 A对照管、A标准管、A空白管,计算∆A测定=A对照管-A测定管,∆A标准=A标准管-A空白管。

单宁含量计算:

1 、标准曲线的绘制:

以标准溶液的浓度为x轴,以∆A标准为y轴,绘制标准曲线,得到方程y=kx+b ,将∆A测定带入方 程中得到x(nmol/mL)

2 、单宁含量计算:

(1) 按蛋白浓度计算:

单宁含量(nmol/mg prot)=x×V提取÷(V提取×Cpr) =x÷Cpr。

(2) 按样本鲜重计算:

单 宁 含 量 (nmol/g鲜 重 )=x×V 提 取 ÷W=x÷W

Cpr:样品蛋白浓度,mg/mL(蛋白浓度需重新用PBS提取测定) ;W:样品质量,g;V提取: 提取液体积,4mL;1000:1µmol=1000nmol。

注意事项:

1 、 当∆A大于1.5时,建议将样品上清液用提取液稀释更大倍数后测量; ∆A过小时,建议减少稀释 倍数或增加样品质量来测定


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