产品内容：

提取液： 液体75mL×2瓶，4℃保存。

试剂一： 粉剂×1瓶，常温保存。

标准品： 粉剂×1支，10mg单宁酸，4℃保存。临用前加入1. 175mL提取液溶解为5000nmol/mL的 标准液。

产品说明：

单宁又称植物多酚，是一类广泛存在于植物体内的多元酚化合物。单宁可作为潜在的生物标记物； 与蛋白质结合的能力又称为收敛性或涩性。其收敛性是多种生理活性的基础，如止血、 抗肿瘤、 抗 衰老等生理活性，也是影响产品口感的因素之一。

根据光谱特性，单宁在275nm下有较强的紫外吸收，通过利用活性炭能够特异吸附单宁的性 质来检测单宁含量。

自备实验用品及仪器：

紫外分光光度计、离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL石英比色皿和蒸馏水。

测定操作：

1 、样本处理：

将样本烘干至恒重，粉碎，过40 目筛之后，称取约0.1g，加入2mL提取液，封口膜封口防止液 体溅出，于70℃水浴提取30min，期间可摇晃数次。12000rpm，25℃ ，离心10min，取上清，用提取 液定容至2mL，待测。

2 、操作步骤：

（1）紫外分光光度计预热30min ，波长调至275nm 。蒸馏水调零。

（2）将5000 nmol/mL标准液用提取液稀释为6.25 、3. 125 、1.5625 、0.78625 、0.4 、0.2nmol/mL标准 溶液。

（3）加样表：

单宁含量计算：

1 、标准曲线的绘制：

以标准溶液的浓度为x轴，以∆A标准为y轴，绘制标准曲线，得到方程y=kx+b ，将∆A测定带入方 程中得到x（nmol/mL）

2 、单宁含量计算：

（1） 按蛋白浓度计算：

单宁含量（nmol/mg prot）=x×V提取÷(V提取×Cpr) =x÷Cpr。

（2） 按样本鲜重计算：

单 宁 含 量 （nmol/g鲜 重 ）=x×V 提 取 ÷W=x÷W

Cpr：样品蛋白浓度，mg/mL（蛋白浓度需重新用PBS提取测定） ；W：样品质量，g；V提取： 提取液体积，4mL；1000:1µmol=1000nmol。

注意事项：

1 、 当∆A大于1.5时，建议将样品上清液用提取液稀释更大倍数后测量； ∆A过小时，建议减少稀释 倍数或增加样品质量来测定。