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产品名称:土壤中性蛋白酶试剂盒

产品规格:50管/24样,100管/48样

产品货号:LE-1-022,LE-2-022

产品报价:

免费咨询:0551-66107970

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货号

产品名称

检测方法

规格

售价(元)

LE-1-022

土壤中性蛋白酶测试盒

可见分光光度法

50/24

650

LE-2-022

土壤中性蛋白酶测试盒

微量法

100/48

1200

土壤中性蛋白酶活性检测试剂盒说明书(可见分光光度法

产品内容:

试剂一:液体20mL×1 瓶,4℃保存;

试剂二:粉剂×1 瓶,4℃保存;临用前加入10mL试剂一,沸水浴搅拌溶解后待用;

试剂三:粉剂×1 瓶,4℃保存;临用前加入10mL 蒸馏水充分溶解待用;

试剂四:液体40mL×1 瓶,4℃保存;

试剂五:液体10mL×1 瓶,4℃保存;

标准品:液体2mL×1 支,0.2 μmol/mL 酪氨酸溶液,4℃保存。

产品说明:

土壤蛋白酶参与土壤中存在的氨基酸、蛋白质以及其他含蛋白质氮的有机化合物的转化,其水解产物是高等植物的氮源之一。土壤中性蛋白酶在中性环境下催化蛋白质水解,与土壤有机质含量、氮素及其他土壤性质有关。中性条件下,土壤中性蛋白酶可将酪蛋白水解产生酪氨酸;在碱性条件下,酪氨酸还原磷钼酸化合物生成钨蓝,在680nm 有特征吸收峰。

实验中所需仪器及设备:

可见分光光度计、水浴锅、可调式移液枪、1mL比色皿、蒸馏水、50目筛(或更小)。

样品处理:

新鲜土样自然风干或 37℃烘箱风干,过 30~50 目筛。

操作步驟:

1、分光光度计预热30min 以上,调节波长至680nm,蒸馏水调零。

2、样本测定:

试剂名称

测定管

对照管

标准管

空白管

风干土样(g)

0.1

0.1

-

-

试剂一(μL)

100

100

-

-

试剂二(μL)

200

 

-

-

混匀后,37℃反应24h,期间振荡5-6 次,使土样与反应液充分接触。

-

-

试剂三(μL)

200

200

-

-

试剂二(μL)

-

200

-

-

混匀,10000rpm 室温离心10min,取上清液

-

-

上清液(μL)

220

220

-

-

标准液(μL)

-

-

220

-

蒸馏水(μL)

-

-

-

220

试剂四(μL)

650

650

650

650

试剂五(μL)

130

130

130

130

混匀,40℃水浴 10min,10000rpm 室温离心 10min,取上清液于 680nm 下读取各管吸光值 A, 分别记为 A 测定管、A 对照管、A 标准管、A 空白管,计算ΔA 测定=A 测定管-A 对照管,ΔA 标准=A 标准管-A 空白管。

注意:标准管、空白管只需测一次。每个测定管设一个对照管。

土壤中性蛋白酶活性计算:

单位定义:每天每g土样中产生1μmol 酪氨酸为一个土壤中性蛋白酶活力单位。

土壤中性蛋白酶(U/g)=C标准×ΔA测定÷ΔA标准×V  反总÷W÷T= 0.1×ΔA测定÷ΔA标准÷W。

标准管:标准管浓度,0.2 μmol/mL;V 反总:酶促反应总体积,0.5mL;T:反应时间,1d;W:样本质量,g。

注意事项

当吸光值大于1时,建议将上清液稀释后进行测定,计算时注意乘以稀释倍数。


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