血钙浓度检测试剂盒说明书（微量法）

注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

规格：100管/96样

测定意义：

血钙几乎全部存在于血浆中，所以血钙主要指血浆钙。血浆钙有离子钙和结合钙两种形式，其中只有离子钙直接起生理作用，它与结合钙处于动态平衡，并受血液 pH 的影响。血钙水平与多种重要的生理功能相关，过高或过低都会影响正常生理功能。本试剂盒用于检测血液中游离钙浓度。

测定原理：

在强碱溶液中游离钙与 GBHA 反应生成红色钙-GBHA 复合物，在 520nm 有吸收峰；通过测定 520nm 吸光度，计算游离钙浓度。

自备仪器和用品：

可调式移液枪、可见分光光度计/酶标仪、石英比色皿/96 孔板、无水甲醇、丙酮和蒸馏水。

试剂组成和配置：

试剂一：液体×1 瓶，4℃保存。

试剂二：液体×1 瓶，4℃保存。

试剂三：液体×1 瓶（空瓶，试剂自备）。取10 mL试剂瓶。依次加入9 mL无水甲醇和1mL丙酮，盖紧混匀即可。

标准液：液体×1 瓶，3μmol/mL，4℃保存。

血钙浓度测定操作：

1.  分光光度计预热30min以上，调节波长到520nm，蒸馏水调零。

2.  空白管：取石英比色皿/96孔板，依次加入蒸馏水12μL，试剂一50μL，混匀；再加入试剂二50μL，混匀；最后加入试剂三100μL，混匀；静置5min后于520nm测定吸光度A空白管。做一个空白管即可。

3.  标准管：取石英比色皿/96孔板，依次加入标准液12μL，试剂一50μL，混匀；再加入试剂二50μL，混匀；最后加入试剂三100μL，混匀；静置5min后于520nm测定吸光度A标准管。做一个标准管即可。

4.  测定管：取石英比色皿/96孔板，依次加入血液样品12μL，试剂一50μL，混匀；再加入试剂二50μL，混匀；最后加入试剂三100μL，混匀；静置5min后于520nm测定吸光度A测定管。记为 A 测定管。

注意：空白管和标准管只需测定一次，最好做三次重复。

血钙浓度计算公式：

血钙含量(μmol/mL)= [C 标准液×(A 测定管－A 空白管)÷(A 标准管－A 空白管)]×V 样品总=3×(A 测定管－A 空白管)÷(A 标准管－A 空白管)

C 标准液：3μmol/mL； V 样总：样品总体积，1 dL=100 mL。

注意事项：

1. 宜早晨空腹采血，并且采血后应该尽快完成测定。

2. 静置 5 分钟后立即测定。

3. 加试剂三后，应该在 30 min 内完成该管的测定。

4. 最低检出限为0.1μmol/mL。