注意：正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。

规格：100T/48S

产品内容：

提取液：液体 50mL×1 瓶，4℃保存。

试剂一：粉剂×1 瓶，4℃避光保存。临用前加入 10 mL 试剂二充分溶解。

试剂二：液体 15mL×1 瓶，4℃保存。

试剂三：粉剂×1 瓶，4℃保存。临用前加入 10mL 蒸馏水充分溶解。

产品说明：

胃蛋白酶由胃粘膜主细胞分泌，分解食物中蛋白质成小肽段。一般用于神经性低酸症的鉴别， 慢性胃炎、慢性胃扩张、慢性十二指肠炎等症状时也会引起胃蛋白酶分泌的减少。

胃蛋白酶可催化血红蛋白水解，水解产物酪氨酸在 275nm 下有特征吸收峰。通过测定吸光值的变化来计算酶活。

自备仪器和用品：

紫外分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔 UV 板、研钵、冰和蒸馏水。

操作步骤：

一、粗酶液提取：

称取约 0.1g 组织加入 1mL 提取液或者 0.1mL 胃液加入 0.9mL 提取液，进行冰浴匀浆。10000 rpm 4℃离心 10 分钟，取上清，即粗酶液，置冰上待测。

二、测定步骤：

1、紫外分光光度计/酶标仪预热 30min 以上，调节波长到 275 nm，蒸馏水调零。

2、按下表操作：

三、胃蛋白酶活性计算：

1、用石英比色皿

（1）按样本蛋白浓度计算：

活性单位（U）定义：37℃下每毫克蛋白每分钟催化血红蛋白水解生成 1μmol 酪氨酸为一个酶活单位。

胃蛋白酶（U/mg prot）=（∆A÷Ɛ÷d×V 反总）÷（Cpr×V 样本）÷T

= 0.786×∆A÷Cpr

（2）按样本鲜重计算：

活性单位（U）定义：37℃下每克组织每分钟催化血红蛋白水解生成 1μmol 酪氨酸为一个酶活单位。

胃蛋白酶（U/g 鲜重）=（∆A÷Ɛ÷d×V 反总）÷（W×V 样本÷V 提）÷T

=0.786×∆A÷W。

（3）按液体体积计算：

活性单位（U）定义：37℃下每毫升液体每分钟催化血红蛋白水解生成 1μmol 酪氨酸为一个酶活单位。

胃蛋白酶（U/mL）=（∆A÷Ɛ÷d×V 反总）÷（V 样本÷V 提×V 液）÷T

= 0.786×∆A

Cpr：粗酶液蛋白质浓度（mg/mL），需要另外测定；V 反总：反应总体积，0.22mL；V 提：粗酶液总体积，1mL；T：催化反应时间，10min；V 样本：加入样本体积，0.02mL；V 液：液体体积， 0.1mL；Ɛ：酪氨酸吸光系数，1.4μmol-1·mL·cm-1；d：光程，1cm。

2、用 96 孔 UV 板

（1）按样本蛋白浓度计算：

活性单位（U）定义：37℃下每毫克蛋白每分钟催化血红蛋白水解生成 1μmol 酪氨酸为一个酶活单位。

胃蛋白酶（U/mg prot）=（∆A÷Ɛ÷d×V 反总）÷（Cpr×V 样本）÷T

= 1.31×∆A÷Cpr

（2）按样本鲜重计算：

活性单位（U）定义：37℃下每克组织每分钟催化血红蛋白水解生成 1μmol 酪氨酸为一个酶活单位。

胃蛋白酶（U/g 鲜重）=（∆A÷Ɛ÷d×V 反总）÷（W×V 样本÷V 提）÷T

=1.31×∆A÷W

（3）按液体体积计算：

活性单位（U）定义：37℃下每毫升液体每分钟催化血红蛋白水解生成 1μmol 酪氨酸为一个酶活单位。

胃蛋白酶（U/mL）=（∆A÷Ɛ÷d×V 反总）÷（V 样本÷V 提×V 液）÷T

= 1.31×∆A

Cpr：粗酶液蛋白质浓度（mg/mL），需要另外测定；V 反总：反应总体积，0.22mL；V 提：V提：粗酶液总体积，1mL；T：催化反应时间，10min；V 样本：加入样本体积，0.02mL；V 液：液体体积，0.1mL；Ɛ：酪氨酸吸光系数，1.4μmol-1·mL·cm-1；d：光程，0.6cm。