花青素还原酶（ANR）试剂盒说明书（分光光度法）

货号：LE-1-188

正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定

测定意义：

花青素还原酶是黄酮合成途径中的关键酶，在植物体内起非常重要的调控作用，对花青素还原酶的调 控机制研究有利于从基因水平改变植物的品质。

测定原理：

花青素还原酶在 NADPH 存在的条件下作用于飞燕草色素转变为表没食子儿茶素和 NADP，使反应体 系在 340nm 处的吸光值下降，吸光值下降速率反应了花青素还原酶的活性。

试剂的组成和配置：

提取液：液体 50ml ×1 瓶，4℃保存。

试剂一：液体 40ml ×1 瓶，4℃保存。

试剂二：粉剂 ×1 瓶，4℃避光保存 。临用前加 3ml 蒸馏水溶解；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复 冻融。

试剂三：粉剂 ×1 瓶，4℃避光保存 。临用前加 3ml 蒸馏水溶解；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复 冻融。

试剂四：粉剂 ×1 瓶，4℃避光保存 。临用前加 3ml 蒸馏水溶解；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复 冻融。

自备仪器和用品：

天平 、研钵 、低温离心机 、紫外分光光度计 、 1ml 石英比色皿 、蒸馏水。

酶液提取：

1、组织：按照组织质量（ g） ：提取液体积(ml)为 1 ：5~ 10 的比例（建议称取约 0. 1g 组织，加入 1ml 提取液） ，进行冰浴匀浆 。 10000g  ，4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。

2、培养液等液体：直接检测。

测定操作表

充分混匀，于 1ml 石英比色皿测定 340 处吸光值 A1，然后在 40℃温育 20min 后，再测定 340nm 处吸光值 A2，△A=A1-A2

酶活性计算公式:

1、按照蛋白浓度计算

酶活性定义 ：在 40℃,pH6.5 条件下，每毫克蛋白每分钟催化 1nmolNADPH 定义为一个酶活力单位。

ANR 活性（nmol/min/mg prot）= ΔA÷ (ε×d）×V 反总÷(V 样×Cpr) ÷T 

= 80.39×ΔA÷Cpr

2、按照样本质量计算

酶活性定义 ：在 40℃,pH6.5 条件下，每克组织每分钟催化 1nmolNADPH 定义为一个酶活力单位。

ANR 活性（nmol/min/g  鲜重）= ΔA÷ (ε×d）×V 反总÷(W ×V 样÷V 样总) ÷T 

= 80.39×ΔA÷W

3、按液体体积计算

酶活性定义 ：在 40℃,pH6.5 条件下，每毫升液体每分钟催化 1nmolNADPH 定义为一个酶活力单位。

ANR 活性（nmol/min/ml）= ΔA÷ (ε×d）×V 反总÷V 样÷T 

= 80.39×ΔA

V 反总：反应体系总体积， 1ml；ε：NADH 摩尔消光系数，6.22×10³ L / mol /cm；d： 比色皿光径，1cm； V 样：加入样本体积，0. 1ml；V 样总：加入提取液体积，1ml；T：反应时间，20min；Cpr：样本蛋白质 浓度，mg/ml；W：样本质量，g