产品名称：多聚半乳糖醛酸反式消除酶(PGTE)测试盒
产品规格：50管/24样,100管/48样
产品货号：LE-1-330,LE-2-330
产品报价：
免费咨询：0551-66107970
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货号 |
产品名称 |
检测方法 |
规格 |
售价（元） |
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LE-1-330 |
多聚半乳糖醛酸反式消除酶(PGTE)测试盒 |
紫外分光光度法 |
50管/24样 |
520 |
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LE-2-330 |
多聚半乳糖醛酸反式消除酶(PGTE)测试盒 |
微量法 |
100管/48样 |
1100 |
多聚半乳糖醛酸反式消除酶（PGTE）试剂盒说明书（紫外分光光度法）
测定意义：
植物细胞壁是对抗病原真菌侵入的屏障，病原菌侵染植物过程中会分泌一系列细胞壁降解 酶， 多聚半乳糖醛酸反式消除酶是一种细胞壁降解酶，在病原菌致病过程中具有重要作用。
测定原理：
PGTE 催化多聚半乳糖醛酸反应释放出不饱和醛酸，不饱和醛酸在 232nm 有特征吸光值，通 过测定 232nm 下吸光值增加速率反映酶活性。
需自备的仪器和用品：
分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、 1mL 石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
试剂组成和配制：
提取液：液体 60mL×1 瓶， 4℃保存；
试剂一：液体 40mL×1 瓶， 4℃保存；
试剂二：液体 6mL×1 瓶， 4℃保存；
试剂三：粉剂× 1 瓶， 4℃保存； 使用前加入 4mL 试剂一，60℃加热震荡溶解， 用不完的试 剂 4℃保存。
粗酶液提取：
1、 细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内， 离心后弃上清；按照细菌或细胞数量 （104 个）： 提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液） ，超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）； 12000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
2、 组织： 按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织， 加入 1mL 提取液）， 进行冰浴匀浆。 12000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
测定步骤：
1、分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 232nm ，蒸馏水调零。
2、样本测定
（1）工作液的配制：临用前按照样本数量，按以下比例配制工作液
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试剂名称(μL） |
测定工作液 |
对照工作液 |
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试剂一 |
800 |
800 |
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试剂二 |
200 |
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蒸馏水 |
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200 |
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试剂三 |
50 |
50 |
（2）按下表在 1mL 石英比色皿中加入如下试剂
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试剂名称(μL） |
测定管 |
对照管 |
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样本 |
100 |
100 |
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测定工作液 |
900 |
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对照工作液 |
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900 |
30℃避光孵育 30min ，232nm 下测定吸光值 A 测定与 A 对照，△A=A 测定-A 对照。每个测定管需设一个对照管。
PGTE 活性计算：
1、按样本蛋白浓度计算：
单位的定义：每 mg 组织蛋白每分钟释放 1 nmol 的不饱和醛酸定义为一个酶活力单位。
PGTE（nmol/min/mg prot）=[ΔA×V 反总÷ (ε×d）×109]÷(V 样×Cpr)÷T= 72.5 ×△A÷Cpr
2、按样本鲜重计算：
单位的定义：每 g 组织每分钟释放 1 nmol 的不饱和醛酸定义为一个酶活力单位。
PGTE（nmol/min/g 鲜重）=[ΔA×V 反总÷ (ε×d）×109]÷(W ×V 样÷V 样总）÷T= 72.5 ×△A ÷W
3、按细菌或细胞密度计算：
单位的定义：每 1 万个细菌或细胞每分钟释放 1 nmol 的不饱和醛酸定义为一个酶活力单位。
PGTE（nmol/min/104 cell）= [ΔA×V 反总÷ (ε×d）×109]÷(500×V 样÷V 样总)×1000÷T =0.145 ×△A
V 反总： 反应体系总体积， 1×10-3 L；ε ：不饱和醛酸摩尔消光系数， 4.6×103 L / mol /cm；d： 比色皿光径， 1cm；V 样：加入样本体积，0.1 mL；V 样总：加入提取液体积， 1 mL；T： 反应时间， 30 min；Cpr：样本蛋白质浓度， mg/mL；W：样本质量， g；500：细菌或细胞 总数， 500 万。
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