乳酸（LA）含量检测试剂盒说明书（分光光度法）

货号：LE-1-228

正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。

测定意义

乳酸是生物体代谢过程中重要的中间产物，与糖代谢、脂类代谢、蛋白质代谢及细胞内能量 代谢密切相关，乳酸含量是评估糖元代谢的和有氧代谢的重要指标。

测定原理

乳酸在乳酸脱氢酶的作用下生成丙酮酸，同时使 NAD⁺ 还原生成 NADH 和 H⁺，H⁺传递给 PMS 生成的 PMSH₂ 还原 INT 生成红色物质，在530nm 处有特征吸收峰。

自备实验用品及仪器

天平、研钵、离心机、可见分光光度计、 1 mL 玻璃比色皿、恒温水浴锅。

试剂组成和配制

提取液：液体 55mL×1 瓶，4℃保存。

试剂一：液体 5mL×1 瓶，4℃保存。

试剂二：液体 12mL×1 瓶，4℃保存。

试剂三：粉剂×1支，-20℃避光保存。临用前加入 1.5mL 蒸馏水充分溶解。

试剂四：粉剂×1瓶，4℃避光保存。临用前加 15mL 蒸馏水充分溶解。

试剂五：粉剂×1支，4℃避光保存。

标准品：液体 1mL×1 支 ，4℃保存。

显色液：临用前根据用量按照提取液（V）：试剂三（V）：试剂四（V）：试剂五（m）=1（mL)： 0.3（mL)：3（mL)： 15（mg）的比例充分混匀。

注意：现配现用，用多少配多少，在棕色瓶中配制，试剂盒中带有 5 个棕色空瓶。

样本处理

1、组织：按照质量（g）：提取液体积(mL)为 1 ：5~10 的比例（建议称取约 0.1g，加入 1mL 提取液）加入提取液，冰浴匀浆后于4℃,  12000g 离心 10min，取上清测定。

2、细胞： 按照细胞数量（10⁴ 个）： 提取液体积（mL）为 500~1000： 1  的比例（建议  500 万细胞加入 1mL 提取液）， 冰浴超声波破碎细胞（功率 300w，超声 3 秒，间隔 7 秒， 总时间 3min）； 于 4℃,  12000g 离心 10min，取上清测定。

3、血清： 直接测定。

测定操作

注意：标准对照管和标准测定管只需测定一次，每个样品测定管设一个样品对照管。

计算公式：

1、按照蛋白含量计算

LA 含量(μmol/mg prot）=△A 样÷△A 标×C 标÷ Cpr 

=2×△A 样÷△A 标÷ Cpr

2、按照样本质量计算

LA 含量(μmol/g  鲜重）=△A 样÷△A 标×C 标÷ W 

=2×△A 样÷△A 标÷ W

3、按照细胞数量计算

LA 含量(μmol/10⁴ cell）=△A 样÷△A 标×C 标÷ 细胞数量 

=2×△A 样÷△A 标÷ 细胞数量

4、按照液体体积计算

LA 含量(μmol/mL）=△A 样÷△A 标×C 标 

=2×△A 样÷△A 标

C 标：标准品浓度，2mmol/L ；W：样本质量，g/mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL

注意事项

1、若吸光值超过 2，请进行适当的稀释后再进行测定，并在计算公式中乘以稀释倍数。

2、最低检出限为 1.8μmol/L。