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产品名称:6-磷酸葡萄糖脱氢酶(G6PDH)/葡萄糖-6-磷酸脱氢酶测试盒

产品规格:50管/48样,100管/96样

产品货号:LE-1-337,LE-2-337

产品报价:

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货号

产品名称

检测方法

规格

售价(元)

LE-1-337

6-磷酸葡萄糖脱氢酶(G6PDH)/葡萄糖-6-磷酸脱氢酶测试盒

紫外分光光度法

50/48

160

LE-2-337

6-磷酸葡萄糖脱氢酶(G6PDH)/葡萄糖-6-磷酸脱氢酶测试盒

微量法

100/96

300

6-磷酸葡萄糖脱氢酶(G6PDH)活性检测试剂盒说明书(紫外分光光度法

产品内容

提取液:液体 50mL×1 瓶,4℃保存;

试剂一:液体 50 mL×1 瓶,4℃保存(切忌放-20℃);

试剂二:粉剂×1 支,4℃保存;用时每支加 650μL 双蒸水充分溶解备用;

试剂三:粉剂×1 支,4℃保存;用时每支加 650μL 双蒸水充分溶解备用。

产品说明

G6PDH(EC 1. 1. 1.49)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,是磷酸戊糖途径的关键

酶,催化 6-磷酸葡萄糖氧化为 6 -磷酸葡萄糖酸内酯,同时将 NADP+还原为 NADPH ,供生物合成 及维持细胞内的还原状态用。因此 6-磷酸葡萄糖脱氢酶活性的高低可以从一定程度上反映出生物体 的生物合成和抗氧化能力。

G6PDH 催化 NADP+还原生成 NADPH ,在 340nm下测定 NADPH 增加速率。

 需自备的仪器和用品

紫外分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1 mL 石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。

 操作步骤

一、样本的处理

1 、细菌、细胞或组织样品的制备:

细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,弃上清,按照每 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取 液,超声波破碎细菌或细胞(功率 20%,超声 3s ,间隔 10s ,重复 30 次)。8000g 4℃离心 10min , 取上清,置冰上待测。

组织:称取约 0. 1g 组织,加入 1mL 提取液进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min ,取上清,置冰上待测。

2 、血清(浆) 样品:直接检测。

二、测定步骤

紫外分光光度计预热 30min 以上,调节波长到 340 nm ,蒸馏水调零。

1试剂一置 37℃水浴预热 30 min。

2、工作液配制:临用前将试剂一、试剂二、试剂三以 15:0.2:0.2 比例混合。

3、加样表:

试剂名称(μL)

测定管(μL)

空白管(μL)

工作液

950

950

样本

50

-

蒸馏水

-

50

于 340nm 处测定 5min 内吸光值变化,第 0s 吸光值记为 A1 ,第 300s 吸光值记为 A2 。记△A 测定=A2 测定-A1 测定,△A 空白=A2 空白-A1 空白。

三、G6PDH 活力单位的计算:

1 、血清(浆) G6PDH 活力的计算:

单位的定义: 每毫升血清(浆)在反应体系中每分钟生成 1 nmol 的 NADPH 定义为一个酶活力单位。 

G6PDH(U/mL)=[(△A 测定-△A 空白) ÷ ( ε×d)×109×V 反总]÷V 样本÷T=643×(△A 测定-△A 空白)

2 、组织中 G6PDH 活力的计算:

(1)按样本蛋白浓度计算:

单位的定义: 每 mg 组织蛋白在反应体系中每分钟生成 1 nmol NADPH 定义为一个酶活力单位。

G6PDH(U/mg prot)=[(△A 测定-△A 空白) ÷ ( ε×d)×109×V 反总]÷(V 样本×Cpr)÷T=643×(△A 测定-△A 空白) ÷Cpr

(2)按样本鲜重计算:

单位的定义: 每 g 组织在反应体系中每分钟生成 1 nmol NADPH 定义为一个酶活力单位。  

G6PDH(U/g  鲜重) =[(△A 测定-△A 空白) ÷ ( ε×d)×109×V 反总]÷(W÷V 提取×V 样本)÷T=643× △A 测定-△A 空白) ÷W

3 、细菌或细胞中 G6PDH 活力的计算:

(1)按样本蛋白浓度计算:

单位的定义: 每 mg 组织蛋白在反应体系中每分钟生成 1 nmol NADPH 定义为一个酶活力单位。

G6PDH(U/mg prot)=[(△A 测定-△A 空白) ÷ ( ε×d)×109×V 反总]÷(V 样本×Cpr)÷T=643×(△A 测定-△A 空白) ÷Cpr

(2)按细菌或细胞数量计算:

单位的定义:  1 万个细菌或细胞在反应体系中每分钟生成 1 nmol NADPH 定义为一个酶活力单位。

G6PDH(U/104 cell)=[ △A 测定-△A 空白) ÷(ε×d)×109×V 反总]÷(V 样本÷V 提取×500)÷T =1.286×(△A 测定-△A 空白)

ε:NADPH 摩尔消光系数,6.22×103L/mol/cm d:1 mL 石英比色皿光径,1cm;V 反总: 反应 总体积,0.001L;V 样本: 加入样本体积,0.05mL;T:反应时间,5min V 提取: 加入提取液体 积,1mL;Cpr:样本蛋白浓度,mg/mL;W:样本鲜重,g;500:细菌或细胞总数,500 万; 109: 单位换算系数,1mol =109nmol 。

注意事项:

1、实验时,样本在冰上放置,以免变性和失活。试剂一 37℃水浴放置。

2、比色皿中反应液的温度必须保持 37℃ ,取小烧杯一只装入一定量的 37℃蒸馏水,将此烧杯放入37℃水浴锅中。在反应过程中把比色皿连同反应液放在此烧杯中。

3、最好两个人同时做此实验,一个人比色,一个人计时,以保证实验结果的准确性。

4、若样本测定初始值(0s )大于 0.5 而△A 测定小于 0. 1 ,可将样本稀释后再行测定。


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