甲醛脱氢酶（Formaldehyde Dehydrogenase ，FDH）试剂盒说明书（分光光度法）

注意：正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。

测定意义

甲醛是一种能与蛋白质、核酸和脂类产生非特异性反应的活泼化合物，对所有生物都具有很 高毒性。甲醛脱氢酶作为含锌中等链醇脱氢酶（ADH）的家庭成员之一，广泛存在于原核 和真核生物中， 该酶能利用 NAD+作为辅酶，将有毒的甲醛氧化，是甲醛氧化途径中的关键 酶。

测定原理

甲醛脱氢酶催化甲醛和 NAD+产生 NADH，在 340nm 处的吸光值会增加，测定 340nm 处的 吸光值变化，可计算得到甲醛脱氢酶的活性。

自备实验用品及仪器

天平、离心机、 分光光度计、1mL 玻璃比色皿、蒸馏水。

试剂组成和配制

提取液：液体 60mL×1 瓶， 4℃保存。

试剂一：液体 30mL×1 瓶， 4℃保存。

试剂二：粉剂×1 瓶， -20℃保存；临用前加入 15mL 水溶解待用，用不完的试剂分装后-20℃ 保存，禁止反复冻融。

试剂三：粉剂×1 瓶，4℃保存；临用前加入 3mL 水溶解待用。

试剂四：液体 3mL×1 瓶，4℃避光保存。

FDH 提取

1.    组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织， 加入 1mL 提取液）进行冰浴匀浆，然后 10000g ，4℃,离心 20min。

2.    细胞： 按照细胞数量（104  个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1  的比例（建议 500 万细胞加入 1mL 提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率 300w，超声 3 秒，间隔 7 秒， 总时间 3min）；然后 10000g ，4℃,离心 10min，取上清置于冰上待测。

3.    液体： 直接检测。

测定操作表

1 、 分光光度计预热 30min，调节波长至 340nm，蒸馏水调零。

2 、 操作表

在比色皿中加入如下试剂

混匀， 于 340nm 下测定初始吸光值 A1 与 5min 后的吸光值 A2 ，△A=A2-A1。 若样本数量较多，可将试剂按比例配成工作液使用。