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产品名称:淀粉分支酶(SBE)测试盒

产品规格:100管/24样,50管/48样

产品货号:LE-1-086,LE-2-086

产品报价:

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货号

产品名称

检测方法

规格

售价(元)

LE-1-086

淀粉分支酶(SBE)测试盒

可见分光光度法

50/24

850

LE-2-086

淀粉分支酶(SBE)测试盒

微量法

100管/48

1600

淀粉分支酶(SBE)试剂盒说明书(可见分光光度法

测定意义

SBE(EC 2.4.1.18)主要存在于植物中,是参与支链淀粉合成的关键酶,测定 SBE 活性在淀 粉生物合成、优质农作物品种选育和品质遗传改良研究中具有重要意义。

测定原理

直链淀粉和碘结合后在 660nm 有特征光吸收,SBE 使直链淀粉含量减少,从而降低了淀粉- 碘复合物在 660nm吸收值 ,一定时间内吸光度下降的百分率可以反映 SBE 活性。

需自备的的仪器和用品

可见分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、 1 mL 玻璃比色皿、研钵、冰、蒸 馏水

试剂的组成和配制

提取液液体 60mL×1 瓶,4℃保存; 

试剂一:液体 20mL×1 瓶 4℃保存;

试剂二:粉剂×2 支 4℃保存; 临用前每支加入 1mL 蒸馏水,95℃沸水浴充分溶解后备用; 用不完的试剂 4℃保存;

试剂三:液体 25mL×1 瓶,4℃保存; 

试剂四:液体 5mL×1 瓶 4℃保存; 

粗酶液提取

按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1: 5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL 提取液), 进行冰浴匀浆。 15000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。

测定步骤

试剂名称(μL)

对照管

测定管

95℃水浴1min后灭活的粗酶液

250

 

粗酶液

 

250

试剂一

320

320

试剂二

30

30

混匀,37℃准确保温 20 min,95℃水浴 5min(盖紧防止水分散失),冷却

试剂三

500

500

试剂四

40

40

混匀,室温静置 10min,用蒸馏水调零,660nm 处读取各管吸光值。

注意:

、可以在不同对照管中加入不同样品的粗酶液,然后集中进行 5min 95℃水浴处理。

2 、试剂二如有沉淀,务必沸水浴溶解后使用。 

SBE 活力单位的计算

1 、按照蛋白浓度计算

单位的定义:以波长 660nm 的吸光度下降百分率表示,每 mg 蛋白在反应体系中每降低 1% 碘蓝值为一个酶活性单位。

SBE 活性(U/mg prot)=( A 对照管-A 测定管)/A 对照管÷Cpr ×100

2 、按照样本鲜重计算

单位的定义:以波长 660nm 的吸光度下降百分率表示,每 g 组织在反应体系中每降低 1%碘 蓝值为一个酶活性单位。

SBE 活性(U/g  鲜重)=(A 对照管-A 测定管)/A 对照管÷(W÷V 样总)×100

V 样总:提取液总体积, 1mL;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样品质量,g。


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