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产品名称:单宁酶(TAN)试剂盒

产品规格:50管/24样,100管/48样

产品货号:YX-C-TAN,YX-W-TAN

产品报价:

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货号

产品名称

检测方法

规格

售价(元)

YX-C-TAN

单宁酶(TAN)试剂盒

可见分光光度法

50/24

600

YX-W-TAN

单宁酶(TAN)试剂盒

微量法

100管/48

1100

单宁酶(TannaseTAN)试剂盒说明书(微量法

正式测定前务必取2-3 个预期差异较大的样本做预测定

测定意义

单宁酶全称是单宁酯酰水解酶(Tannase,EC 3.1.1.20),它可以水解没食子酸单宁中的酯键和缩酚羧键,生成没食子酸和葡萄糖。

测定原理

使用抗氧化剂没食子酸丙酯(PG)作为单宁酶酶促反应的底物,在 270nn 下测定底物 PG反应前后的光密度变化,计算单宁酶酶活力。

需自备的的仪器和用品

紫外分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96 UV、研钵、冰、蒸馏水

试剂的组成和配制

试剂一:液体 100mL×2 瓶,4℃保存;


试剂二:粉剂×1 支,4℃保存;临用前每支加入 6mL 试剂一,充分溶解后备用;用不完的试剂 4℃保存;

粗酶液提取

按照组织质量(g):试剂一体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL试剂一),进行冰浴匀浆。10000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。液体样本:直接取上清测定。

测定步骤

1、分光光度计预热 30min 以上,调节波长到 270 nm,蒸馏水调零。

2、加样表

试剂名称(μL

对照管

测定管

95℃水浴 5min 后灭活的粗酶液

50

 

粗酶液

 

50

试剂二

50

50

混匀,40℃准确保温 10 min 后,置 95℃水浴中 10 min(盖紧,防止水分散失),冷却

试剂一

900

900

混匀,取 200uL 至微量石英比色皿或 96 UV 板中,270nm 处读取各管吸光值。计算ΔA=A 对照-A 测定。每个测定管需设个一个对照管。

注意:

1 可以在不同对照管中加入不同样品的粗酶液,然后集中进行 5min 95℃沸水浴处理。

2 务必使用 96 UV 板(非普通酶标板,普通酶标板只能透过可见光,不能透过紫外光, 检测波长小于 340nm 务必使用 UV 板)。

TAN 活力单位的计算

用微量石英比色皿测定的计算公式如下

标准条件下测定回归方程为 y = 0.0058x + 0.0044,R2 = 0.9994;x 为 PG 含量(µmol/L),y为吸光值。

1、按样本体积计算

单位的定义:40℃下每毫升粗酶液每分钟水解减少 0.01µmol 底物 PG 所需要的酶量定义为一个酶活单位。

TAN 活性(µmol/min/mL)=(ΔA-0.0044)÷0.0058÷1000×V 反总÷0.01÷V 样÷T

=34.48×( ΔA-0.0044)

2、按照蛋白浓度计算

单位的定义:40℃下每毫克蛋白每分钟水解减少 0.01µmol 底物 PG 所需要的酶量定义为一个酶活单位(U)。

TAN 活性((µmol/min/mg prot)=(ΔA-0.0044)÷0.0058÷1000×V 反总÷0.01÷(V 样×Cpr)÷T

=34.48×(ΔA-0.0044)÷Cpr

3、按照样本鲜重计算

单位的定义:40℃下每克样品每分钟水解减少 0.01µmol 底物 PG 所需要的酶量定义为一个酶活单位(U)。

TAN 活性(µmol/min/g  鲜重)=(ΔA-0.0044)÷0.0058÷1000×V 反总÷0.01÷(V 样÷V 样总×W)÷T

=34.48×(ΔA-0.0044)÷W

V 反总:反应体系总体积,1mL V 样:加入样本体积,0.05mL;V 样总:加入提取液体积,1 mL;T:反应时间,10min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g。


96 孔板测定的计算公式如下

标准条件下测定回归方程为 y = 0.0029x + 0.0044,R2 = 0.9994;x 为 PG 含量(µmol/L),y为吸光值。

1、按样本体积计算

单位的定义:40℃下每毫升粗酶液每分钟水解减少 0.01µmol 底物 PG 所需要的酶量定义为一个酶活单位(U)。

TAN 活性(µmol/min/mL)=(ΔA-0.0044)÷0.0029÷1000×V 反总÷0.01÷V 样÷T

=68.97×( ΔA-0.0044)

2、按照蛋白浓度计算

单位的定义:40℃下每毫克蛋白每分钟水解减少 1µmol 底物 PG 所需要的酶量定义为一个酶活单位(U)。

TAN 活性(µmol/min/mg prot)=(ΔA-0.0044)÷0.0029÷1000×V 反总÷0.01÷(V 样×Cpr)÷T

=68.97×( ΔA-0.0044)÷Cpr

3、按照样本鲜重计算

单位的定义:40℃下每克样品每分钟水解减少 0.01µmol 底物 PG 所需要的酶量定义为一个酶活单位(U)。

TAN 活性(µmol/min/g  鲜重)=(ΔA-0.0044)÷0.0029÷1000×V 反总÷0.01÷(V 样÷V 样总×W)÷T

=68.97×( ΔA-0.0044)÷W

V 反总:反应体系总体积,1mL V 样:加入样本体积,0.05mL;V 样总:加入提取液体积,1 mL;T:反应时间,10min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g。


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