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产品名称:L-半乳糖酸-1,4-内酯脱氢酶(GalLDH)测试盒

产品规格:50管/48样,100管/96样

产品货号:LE-1-275,LE-2-275

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货号

产品名称

检测方法

规格

售价(元)

LE-1-275

L-半乳糖酸-1,4-内酯脱氢酶(GalLDH)测试盒

分光光度法

50管/48样

1200

LE-2-275

L-半乳糖酸-1,4-内酯脱氢酶(GalLDH)测试盒

微量法

100管/96样

2300

L-半乳糖酸-1,4-内酯脱氢酶(Gal LDH)活性测定试剂盒说明书(分光光度法

货号:LE-1-275

正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。

测定意义:

L-半乳糖途径是合成 AsA 的主要途径。GalLDH 位于线粒体内膜,负责催化植物体内 AsA  生物合成的最后一步,也是该途径的关键酶之一,对植物体内AsA 含量的积累起着至关重 要的作用。

测定原理:

Gal LDH 催化 L-半乳糖内酯还原细胞色素 c(Cyt c),还原型 Cyt c  550nm 有吸收峰;测 定还原型 Cyt c 增加速率,来计算 GalLDH 活性。

自备仪器和用品:

台式离心机、可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿、可调式移液器、研钵、冰和蒸馏水。

试剂组成和配制:

试剂一:液体 50mL×1 瓶,4℃保存。

试剂二:粉剂×1瓶,4℃保存。临用前加入 40mL 蒸馏水,充分溶解。

试剂三:粉剂×1瓶,4℃保存。临用前加入 5mL 蒸馏水,充分溶解。

粗酶液提取:

按照组织质量(g):试剂一体积(mL)为 1 5~ 10 的比例(建议称取约 0. 1g 组织,加入 1mL 试剂一)进行冰浴匀浆。13000g 4℃离心 10min ,取上清置冰上待测。

Gal LDH 测定操作:

1、分光光度计预热 30 min ,调节波长到 550nm ,蒸馏水调零。

2、试剂二在 25℃水浴锅中预热 30 min

3、依次在 1mL 玻璃比色皿中加入 100μL 上清液800μL 预热的试剂二和 100μL 试剂三,迅 速混匀后于 550nm 比色,记录 10s 和 130s 的吸光值 A1 和 A2 △A = A2﹣A1。

Gal LDH 活性计算公式:

1、按蛋白浓度计算

GalLDH 活性单位定义:25℃中每毫克蛋白每分钟还原 mol Cyt c  1 个酶活单位。

Gal LDH mol/min/mg prot) = △A÷ε÷d×V 反总×106÷(Cpr×V 样)÷T 

=289×△A ÷Cpr

2、按样本质量计算

GalLDH 活性单位定义:25℃中每克样品每分钟还原 1μmol Cyt c  1 个酶活单位

Gal LDH mol/min/g 鲜重) = △A÷ε÷d×V 反总×106÷(W×V 样÷V 样总)÷T

=289×△A ÷W

ε:还原型 Cyt c 摩尔消光系数,17.3×103L/ mol/cmd:比色皿光径(cm) 1cmV 反总:反 应体系总体积,1mL=0.001 L;106 1mol=1×106μmolV 样:加入反应体系中上清液体积, 100μL=0. 1mL;Cpr:上清液蛋白浓度,mg/mL ,蛋白质浓度需要另外测定,建议使用本公 司蛋白质含量 BCA 试剂盒;V 样总:加入提取液体积,1mLW ,样本质量,g;T :反应 时间,2min。

注意事项:

试剂二和试剂三配制好后 3 天内使用完。


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