产品名称:L-半乳糖苷-1,4-内酯脱氢酶(Gal LDH)测试盒
产品规格:50管/48样,100管/96样
产品货号:GLDH-2-W,GLDH-1-W
免费咨询:0551-66107970
货号 |
产品名称 |
检测方法 |
规格 |
售价(元) |
GLDH-2-W |
L-半乳糖苷-1,4-内酯脱氢酶(Gal LDH)测试盒 |
可见分光光度法 |
50管/48样 |
1200 |
GLDH-1-W |
L-半乳糖苷-1,4-内酯脱氢酶(Gal LDH)测试盒 |
微量法 |
100管/96样 |
2300 |
规格:50管/48样
注意:正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。
测定意义:
L-半乳糖途径是合成 AsA 的主要途径。Gal LDH 位于线粒体内膜,负责催化植物体内 AsA 生物合成的最后一步,也是该途径的关键酶之一,对植物体内AsA 含量的积累起着至关重 要的作用。
测定原理:
Gal LDH 催化 L-半乳糖内酯还原细胞色素 c (Cyt c ),还原型 Cyt c 在 550nm 有吸收峰;测 定还原型 Cyt c 增加速率,来计算Gal LDH活性。
自备仪器和用品:
台式离心机、可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿、可调式移液器、研钵、冰和蒸馏水。
试剂组成和配制:
试剂一:液体 50mL×1 瓶,4℃保存。
试剂二:粉剂×1 瓶,4℃保存。临用前加入 40mL 蒸馏水,充分溶解。
试剂三:粉剂×1 瓶,4℃保存。临用前加入 5mL 蒸馏水,充分溶解。
粗酶液提取:
按照组织质量 (g):试剂一体积(mL)为 1 :5~ 10 的比例 (建议称取约 0. 1g 组织,加入 1mL 试剂一) 进行冰浴匀浆。13000g ,4℃离心 10min ,取上清置冰上待测。
Gal LDH 测定操作:
1. 分光光度计预热 30 min ,调节波长到 550nm ,蒸馏水调零。
2. 试剂二在 25℃水浴锅中预热 30 min。
3. 依次在 1mL 玻璃比色皿中加入 100μL 上清液、800μL 预热的试剂二和 100μL 试剂三,迅 速混匀后于 550nm 比色,记录 10s 和 130s 的吸光值 A1 和 A2 ,△A = A2﹣A1。
Gal LDH 活性计算公式:
( 1). 按蛋白浓度计算
Gal LDH 活性单位定义:25℃中每毫克蛋白每分钟还原 1μmol Cyt c 为 1 个酶活单位。
Gal LDH ( μmol/min/mg prot) = △A÷ε÷d ×V 反总×106÷ (Cpr×V 样) ÷T
=289×△A ÷Cpr
(2). 按样本质量计算
Gal LDH 活性单位定义:25℃中每克样品每分钟还原 1μmol Cyt c 为 1 个酶活单位。
Gal LDH ( μmol/min/g 鲜重) = △A÷ε÷d ×V 反总×106÷ (W×V 样÷V 样总) ÷T
=289×△A ÷W
ε :还原型 Cyt c 摩尔消光系数,17.3×103L/ mol/cm;d:比色皿光径(cm) ,1cm;V 反总:反 应体系总体积,1mL=0.001 L;106 :1mol=1×106 μmol;V 样:加入反应体系中上清液体积, 100μL=0. 1mL;Cpr:上清液蛋白浓度,mg/mL ,蛋白质浓度需要另外测定,建议使用本公 司蛋白质含量 BCA 试剂盒;V 样总:加入提取液体积,1mL;W ,样本质量,g;T :反应 时间,2min。
注意事项:
试剂二和试剂三配制好后 3 天内使用完。
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