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产品名称:黄嘌呤氧化酶(XOD)测试盒

产品规格:50管/48样,100管/96样

产品货号:LE-1-165,LE-2-165

产品报价:

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货号

产品名称

检测方法

规格

售价(元)

LE-1-165

黄嘌呤氧化酶(XOD)测试盒

分光光度法

50/48

240

LE-2-165

黄嘌呤氧化酶(XOD)测试盒

微量法

100管/96

480

黄嘌呤氧化酶(xanthione oxidase,XOD)试剂盒说明书(分光光度法)

货号:LE-1-165

正式测定前务必取 2-3个预期差异较大的样本做预测定

测定意义:

XOD(EC 1.17.3.2)催化黄嘌呤氧化生成尿酸和超氧阴离子,是活性氧主要来源之一;同时也是核苷酸代谢的关键酶之一。XOD主要分布于哺乳动物的心,肺,肝脏等组织中,当肝功能受损时,XOD大量释放到血清中,对肝损害的诊断具有特异性的意义。

测定原理:

XOD催化黄嘌呤产生尿酸,尿酸在290nm下有特征吸收峰。

需自备的仪器和用品:

紫外分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1mL石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。

试剂组成和配制:

提取液:60mL×1 瓶,4℃保存;

试剂一:60mL×1 瓶,4℃保存;

试剂二:粉剂×4 瓶,4℃保存。

粗酶液提取:

1、细菌、细胞或组织样品的制备:

细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104个):提取液体积(mL)为 500~1000:1 的比例(建议500万细菌或细胞加入1mL提取液),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率20%或200W,超声3s,间隔10s,重复30次);8000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。

组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入1mL提取液),进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。

2、血清(浆)样品:直接检测。

操作步骤:

1、分光光度计预热 30min 以上,调节波长至 290nm,蒸馏水调零。

2、XOD 检测工作液的配制:用时在每瓶试剂二中加入 15mL 试剂一,充分混匀,待用;用不完的试剂 4℃可保存一周;

3、测定前将 XOD 检测工作液 37℃(哺乳动物)或 25℃(其它物种)水浴 10min。

4、取 1mLXOD 检测工作液于 1mL 石英比色皿中,再加入 35μL 样本,混匀,室温下立即测定 290nm下的初始吸光值 A1 和 1min 后的吸光值 A2,计算 ΔA=A2-A1。

XOD 活性计算:

1、血清(浆)XOD 计算:

单位的定义:每毫升血清(浆)每分钟催化产生 1nmol 尿酸定义为一个酶活力单位。

XOD(nmol/min/mL)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×10 9 ]÷V 样÷T=2424×ΔA

2、组织、细菌或细胞中 XOD 计算:

(1)按样本蛋白浓度计算:

单位的定义:每 mg 组织蛋白每分钟催化产生 1nmol 尿酸定义为一个酶活力单位。

XOD(nmol/min/mg prot)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷(V 样×Cpr)÷T

=2424×ΔA÷Cpr

2)按样本鲜重计算:

单位的定义:每 g 组织每分钟催化产生 1nmol 尿酸定义为一个酶活力单位。

XOD(nmol/min/g 鲜重)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(W×V样÷V样总)÷T

=2424×ΔA÷W

3)按细菌或细胞密度计算:

单位的定义:每一万个细菌或细胞每分钟催化产生 1nmol 尿酸定义为一个酶活力单位。

XOD(nmol/min/104cell)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(500×V 样÷V 样总)÷T

=4.848×ΔA

V 反总:反应体系总体积,1.035×10 -3 L;ε:尿酸摩尔消光系数,1.22×104 L/ mol /cm;d:比色皿光径,1cm;V 样:加入样本体积,0.05 mL;V 样总:加入提取液体积,1 mL;T:反应时间,1 min;W:样本质量,g;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;500:细胞或细菌总数,500 万。


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