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产品名称:一氧化氮(NO)含量测试盒

产品规格:50管/24样,100管/48样

产品货号:YX-C-A804,YX-W-A804

产品报价:

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货号

产品名称

检测方法

规格

售价(元)

YX-C-A804

一氧化氮(NO)试剂盒

可见分光光度法

50管/24样

200

YX-W-A804

一氧化氮(NO)试剂盒

微量法

100管/48样

380

一氧化氮(Nitric oxide,NO)含量测定试剂盒说明书(微量法)

注意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

规格:100 管/48 样

测定意义:

NO(Nitric Oxide,NO)广泛分布于生物体内神经、循环、呼吸、消化、泌尿生殖等系统中,特别是神经组织中较丰富。它作为细胞间及细胞内的信息物质,发挥信号传递的作用,是一种新型的生物信使分子,在机体的生理、病理过程中起着重要的作用。

测定原理:

NO在体内或水溶液中极易氧化生成 NO2-,在酸性条件下,NO2-与重氮盐磺酸胺生成重氮化合物,进一步与萘基乙烯基二胺偶合,产物在550nm处有特征吸收峰,测定其吸光值,可以计算NO含量。为了排除样品色素等的影响,每个样品需做对照管。

自备实验用品及仪器:

天平、研钵或匀浆器、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板、蒸馏水。

试剂组成和配制:

提取液:液体 100mL×1  瓶,4℃保存。

试剂一:液体 3mL×1  瓶,4℃避光保存。

试剂二:液体 3mL×1  瓶,4℃保存。

试剂三:液体 6mL×1  瓶,4℃避光保存。

样品处理:

1、组织:按照组织质量g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液)进行冰浴匀浆。10000g,4℃离心 15min,取上清,置冰上待测。

2、细菌、真菌:按照细胞数量104个):提取液体积mL)500~1000:1的比例(建议500 万细胞加入1mL提取液),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3秒,间隔7秒,总时间3min);然后10000g,4℃,离心 15min,取上清置于冰上待测。

3、体液和培养液等其它液态样品:直接测定。

测定步骤和操作表:

1、 分光光度计或酶标仪预热30min以上,调节波长至550nm。

2、 操作表

 

对照管

测定管

样品(μL)

100

100

试剂一(μL)

 

50

试剂二(μL)

50

 

试剂三(μL)

50

50

混匀,4℃室温静置 15min,于微量石英比色皿/96 孔板,对照管调零,测定 550nm  处吸光值,记为 A 550 。

NO 含量计算:

用微量石英比色皿测定的计算公式如下

标准曲线回归方程为:y=0.016x-0.0103,R2=0. 9986

1、组织样品

NO含量定义:25℃时,每克样品或每毫克蛋白15min生成1μmoL NO2-,相当于1μmoL NO。

(1)按样本质量计算

NO 含量(μmoL/g)=(A 550 +0.0103)÷0.016×V 反总÷(V ÷V 样总×W)×10 -3= 0.125×(A 550 +0.0103)÷W

(2)按样本蛋白浓度计算

NO 含量(μmoL/mg prot)=(A 550 +0.0103)÷0.016×V 反总÷(V 样×Cpr)×10 -3= 0.125×(A 550 +0.0103)÷Cpr

2、其他样品:

NO 含量定义:25℃时,每升样品15min生成 1μmoL NO2-,相当于1μmoL NO。

NO 含量(μmoL/L)=(A 550+0.0103)÷0.016×V 反总÷V 样= 125×(A 550+0.0103)

V 反总:反应总体积,0.2mL;V 样:反应中样品体积,0.1mL;V 样总:加入提取液体积,1mL;W:样品质量,g;Cpr:蛋白浓度,mg/mL

96  孔板测定的计算公式如下

标准曲线回归方程为:y= 0.008x-0.0103,R2=0. 9986

1、组织样品:

NO含量定义:25℃时,每克样品或每毫克蛋白15min生成 1μmoL NO2-,相当于1μmoL NO。

(1)按样本重量计算

NO 含量(μmoL/g)=(A 550 +0.0103)÷0.008×V 反总÷(V ÷V 样总×W)×10 -3= 0.25×(A 550+0.0103)÷W

(2)按样本蛋白浓度计算

NO 含量(μmoL/mg prot)=(A 550+0.0103)÷0.008×V 反总÷(V 样×Cpr)×10 -3= 0.25×(A 550+0.0103)÷ Cpr

2、细胞

NO 含量定义:25℃时,每104个细胞15min  生成 1μmoL NO2-,相当于1μmoL NO。

NO 含量μmol/104cell)=(A 550+0.0103)÷0.008×V反总÷(V÷V样总×细胞数量×10 -3= 0.25×(A 550+0.0103)÷细胞数量(万个)

3、 其他样品

NO 含量定义:25℃时,每升样品 15min 生成 1μmoL NO2-,相当于1μmoL NO。

NO 含量(μmoL/L)=(A 550 +0.0103)÷0.008× V 反总÷V 样= 250×(A 550 +0.0103)

V 反总:反应总体积,0.2mL;V 样:反应中样品体积,0.1mL;V 样总:加入提取液体积,1mL;W:样品质量,g;Cpr:蛋白浓度,mg/mL

注意事项:

1、试剂盒 2-8℃保存。

2、尽量使用新鲜样品进行检测,试剂三有腐蚀性,操作时请做好防护措施。

3、若检测出得 OD 值在标准曲线范围外,请将样品进行适当的浓缩或稀释,并在计算公式中除以4、浓缩倍数或者乘以稀释倍数。

5、最低检出限为 0.65μmoL/L。


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