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产品名称:一氧化氮(NO)测试盒

产品规格:50管/24样,100管/48样

产品货号:LE-1-306,LE-2-306

产品报价:

免费咨询:0551-66107970

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货号

产品名称

检测方法

规格

售价(元)

LE-1-306

一氧化氮(NO)测试盒

分光光度法

50/24

200

LE-2-306

一氧化氮(NO)测试盒

微量法

100管/48

370

一氧化氮(NO)含量检测试剂盒说明书(分光光度法

货号:LE-1-306

正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

产品内容:

提取液:液体 50mL×1 瓶,4℃保存。

试剂一:液体 6mL×1 瓶,4℃避光保存。

试剂二:液体 6mL×1 瓶,4℃保存。

试剂三:液体 12mL×1 瓶,4℃避光保存。

产品说明:

NO(Nitric Oxide,NO)广泛分布于生物体内神经、循环、呼吸、消化、泌尿生殖等系统中, 特别是神经组织中较丰富。它作为细胞间及细胞内的信息物质,发挥信号传递的作用,是一种新型的生物信使分子,在机体的生理、病理过程中起着重要的作用。

NO 在体内或水溶液中极易氧化生成 NO2- ,在酸性条件下,NO2-与重氮盐磺酸胺生成重氮化合物,进一步与萘基乙烯基二胺偶合,产物在550nm处有特征吸收峰,测定其吸光值,可以计算NO 含量。为了排除样品色素等的影响,每个样品需做对照管。

自备实验用品及仪器:

天平、研钵或匀浆器、可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿、蒸馏水。

操作步骤:

一、样品处理

1、组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL) 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入1mL提取液)进行冰浴匀浆。12000rpm,4℃离心15min,取上清,置冰上待测。

2、细菌、真菌:按照细胞数量(104个):提取液体积mL) 500~1000:1 的比例(建议 500 万细胞加入1mL提取液),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3秒,间隔7秒,总时间 3min); 然后12000rpm,4℃,离心15min,取上清置于冰上待测。

3、体液和培养液等其它液态样品:直接测定

、测定步骤和操作表

 

对照管

测定管

样品(µL)

400

400

试剂一(µL)

 

250

试剂二(µL)

250

 

试剂三(µL)

250

250

混匀,室温静置 15min,以对照管调零,1mL玻璃比色皿,测定 A 550。

三、NO 含量计算

标准曲线回归方程为:y= 0.016x -0.0103,R2 = 0.9986

1、组织样品:

NO含量定义:25℃时,每克样品或每毫克蛋白15min 生成 1µmoL NO2-,相当于1µmoL NO。

(1)按样本质量计算

NO 含量(µmoL/g )=(A550 +0.0103)÷0.016×V 反总÷(V 样÷V 样总×W )×10 -3

= 0.14×(A550 +0.0103)÷W

(2)按样本蛋白浓度计算

NO 含量(µmoL/mg prot)=(A550 +0.0103)÷0.016×V 反总÷(V 样×Cpr )×10 -3

= 0.14×(A550 +0.0103)÷Cpr

2、其他样品:

NO 含量定义:25℃时,每升样品 15min 生成 1µmoL NO2-,相当于1µmoL NO。

NO 含量µmoL/L =(A550 +0.0103)÷0.016×V 反总÷V样

= 140×(A550 +0.0103)

反总:反应总体积,0.9mL;V 样:反应中样品体积,0.4mL;V 样总:加入提取液体积,1mL;W:样品质量,g;Cpr:蛋白浓度,mg/mL

注意事项:

1、试剂盒 2-8℃保存。

2、尽量使用新鲜样品进行检测,试剂三有腐蚀性,操作时请做好防护措施。

3、若检测出得 OD 值在标准曲线范围外,请将样品进行适当的浓缩或稀释,并在计算公式中除以浓缩倍数或者乘以稀释倍数。


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