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产品名称:丙二醛(MDA)含量测试盒

产品规格:50管/48样,100管/96样

产品货号:YX-C-A401,YX-W-A401

产品报价:

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货号

产品名称

检测方法

规格

售价(元)

YX-C-A401

丙二醛(MDA)测试盒

可见分光光度法

50/48

200

YX-W-A401

丙二醛(MDA)测试盒

微量法

100管/96

380

丙二醛(malondialdehydeMDA)含量试剂盒说明书(微量法

正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定

测定意义:

氧自由基作用于脂质的不饱和脂肪酸,生成过氧化脂质;后者逐渐分解为一系列复杂的化合物,其中包括MDA。通过检测MDA的水平即可检测脂质氧化的水平。

测定原理:

MDA与硫代巴比妥酸(thiobarbituric acidTBA)缩合,生成红色产物,在532nm有最大吸收峰,进行比色后可估测样品中过氧化脂质的含量;同时测定600nm下的吸光度,利用532nm600nm下的吸光度的差值计算 MDA 的含量。

需自备的仪器和用品:

可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96 孔板、研钵、冰和蒸馏水。

试剂的组成和配置:

提取液:液体 100mL×1 瓶,4℃保存;

试剂一:液体 30mL×1 瓶,4℃保存;

注意事项:

临用前注意试剂一是否完全溶解,如未溶解,可以70℃加热,并振荡以促进溶解。

MDA 提取:

1、细菌、细胞或组织样品的制备:

细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104个):提取液体积(mL)为500~10001的比例(建议500万细菌或细胞加入1mL提取液),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率20%或200W,超声3s,间隔10s,重复30次);8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。

组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)15~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液),进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。

2、血清(浆)样品:直接检测。

测定步骤:

1、吸取0.3mL试剂一于1.5mL离心管中,再加入0.1mL样本, 混匀。

295℃水浴中保温30min(盖紧,防止水分散失),置于冰浴中冷却,10000g25℃,离心10min

3、吸取200μL上清液于微量石英比色皿或96孔板中,测定532nm600nm处的吸光度,记为A532 A600,ΔA= A532-A600

MDA 含量计算:

a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下

1、血清(浆)中 MDA 含量的计算:

MDA 含量(nmol/ mL)=[ ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷V =25.8×ΔA

2、细菌、细胞或动物组织中 MDA 含量计算

1)按照蛋白浓度计算

MDA含量(nmol/mg prot)=[ ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷(Cpr×V )=25.8×ΔA ÷Cpr

需要另外测定,建议使用本公司 BCA 蛋白质含量测定试剂盒。

2)按照样品质量计算

MDA含量(nmol/g 鲜重)=[ ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(W×V样÷V样总)

=25.8×ΔA ÷W

(3 ) 按照细菌或细胞密度计算:

MDA含量(nmol/104)=[ ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷(500×V 样÷V 样总)=0.0516×ΔA

V 反总:反应体系总体积, 4×10-4L;ε:丙二醛摩尔消光系数,155×103L/mol/cmd:比色皿光径,1cmV 样:加入样本体积,0.1 mLV 样总:加入提取液体积,1 mLCpr:样本蛋白质浓度,mg/mLW:样本质量,g500:细胞或细菌总数,500万。

b.96 孔板测定的计算公式如下

1、血清(浆)中 MDA 含量的计算:

MDA含量(nmol/mL)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷V =51.6×ΔA

2、细菌、细胞或动物组织中 MDA 含量计算

1)按照蛋白浓度计算

MDA含量(nmol/mg prot)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(Cpr×V )=51.6×ΔA÷Cpr

需要另外测定,建议使用本公司BCA蛋白质含量测定试剂盒。

2)按照样品质量计算

MDA含量(nmol/g 鲜重)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷(W×V样÷V样总)=51.6×ΔA÷W

(3 ) 按照细菌或细胞密度计算:

MDA含量(nmol/104)=[ ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷(500×V 样÷V 样总)=0.1032×ΔA

V 反总:反应体系总体积,4×10-4L;ε:丙二醛摩尔消光系数,155×103L/mol/cm;d:96孔板光径,0.5cm;V 样:加入样本体积,0.1 mL;V 样总:加入提取液体积,1 mL;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g;500:细胞或细菌总数,500 万。


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