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地址:合肥市包河经济开发区花园大道17号

产品名称:过氧化物酶(POD)测试盒

产品规格:50管/48样,100管/96样

产品货号:LE-1-160,LE-2-160

产品报价:

免费咨询:0551-66107970

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货号

产品名称

检测方法

规格

售价(元)

LE-1-160

过氧化物酶(POD)测试盒

可见分光光度法

50/48

300

LE-2-160

过氧化物酶(POD)测试盒

微量法

100管/96

580

过氧化物酶(POD)测试盒说明书(可见分光光度法)

产品内容:

提取液:液体 60mL×1 瓶,4℃保存;

试剂一:液体 60mL×1 瓶,4℃保存;

试剂二:液体 0.33mL×2 瓶,4℃保存;用时每瓶加入 5mL 试剂一;用不完的试剂 4℃保存一周;

试剂三:液体 10 mL×1 瓶,4℃保存。

产品说明:

POD(EC 1.11.1.7)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,可催化过氧化氢氧化酚类和胺类化合物,具有消除过氧化氢和酚类、胺类毒性的双重作用。POD 催化 H2O2 氧化特定底物, 470nm 有特征光吸收。

需自备的仪器和用品:

可见分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1mL 玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水

操作步骤:

一、粗酶液提取:

1、 细菌、细胞或组织样品的制备:

细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104 个):提取液体积(mL) 500~1000:1 的比例(建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率 20%或 200W,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次);8000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。

组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL) 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入1mL 提取液),进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。

2 血清(浆)样品:直接检测。

二、测定步骤:

1、分光光度计预热 30min 以上,调节波长至 470nm,蒸馏水调零。

2、测定前将试剂一、二和三 37℃(哺乳动物)或 25℃(其它物种)放置 10min。

3、样本测定表

试剂名称(µL

测定管

样本

15

蒸馏水

270

试剂一

520

试剂二

130

试剂三

135

在 1mL 玻璃比色皿中按顺序加入上述试剂,立即混匀并计时,记录 470nm 下 30s 时的吸光值A1 和 1min30s 后的吸光值 A2。计算ΔA=A2-A1。

注意:

a.若一次性测定样本较多,可将试剂一、二、三和蒸馏水按比例配成混合液,在 37℃(哺乳动物 25℃(其它物种)放置 10min 以上,测定时加入 15µL 样本和 1055µL 混合液测定。

b.如果ΔA 小于 0.005,可将反应时间延长到 5min。如果ΔA 大于 0.5,可将样本用提取液稀释后测定,计算公式中乘以相应稀释倍数。

三、POD 活性计算:

1、 血清(浆)POD 活性
单位定义:每 mL 血清(浆)在每 mL 反应体系中每分钟 A470 变化 0.01 为一个酶活力单位。

计算公式:POD(U/mL)=ΔA×V 反总÷V 样÷0.01÷T =7133×ΔA
2、 组织、细菌或细胞 POD 活性
(1)按样本蛋白浓度计算
单位定义:每 mg 组织蛋白在每 mL 反应体系中每分钟 A470 变化 0.01 为一个酶活力单位。
POD(U/mg prot)=ΔA×V 反总÷(V 样×Cpr)÷0.01÷T =7133×ΔA÷Cpr
(2)按样本鲜重计算
单位定义:每 g 组织在每 mL 反应体系中每分钟 A470 变化 0.01 为一个酶活力单位。
POD(U/g 鲜重)=ΔA×V 反总÷(W× V 样÷V 样总)÷0.01÷T =7133×ΔA÷W
(3)按细菌或细胞数量计算
单位定义:每 1 万个细菌或细胞在每 mL 反应体系中每分钟 A470 变化 0.01 为一个酶活力单位。
POD(U/104 cell)=ΔA×V 反总÷(500×V 样÷V 样总)÷0.01÷T =14.27×ΔA
V 反总:反应体系总体积,1.07mL;V 样:加入样本体积,0.015mL;V 样总:加入提取液体积,1 mL;T:反应时间,1 min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本鲜重,g;500:细菌或细胞总数,500 万。


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