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产品名称:碱性磷酸酶(AKP/ALP)测试盒

产品规格:50管/24样,100管/48样

产品货号:LE-1-364,LE-2-364

产品报价:

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货号

产品名称

检测方法

规格

售价(元)

LE-1-364

碱性磷酸酶(AKP/ALP)测试盒

可见分光光度法

50/24

160

LE-2-364

碱性磷酸酶(AKP/ALP)测试盒

微量法

100/48

300

碱性磷酸酶( AKP/ALP 活性测定试剂盒说明书(可见分光光度法)

测定意义:

AKP/ALP 是一种含锌的糖蛋白酶,在碱性环境中可水解各种天然及人工合成的磷脂单酯化 合物。AKP/ALP 广泛分布于人体各脏器中,以肝脏为主。

测定原理:

在碱性环境中,AKP/ALP 催化磷酸苯二钠生成游离酚;酚与4-氨基安替比林和铁氰化钾反 应红色亚醌衍生物,在 510nm 有特征光吸收;通过测定 510  nm 吸光度增加速率,来计算 AKP 活性。

自备仪器和用品

可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、 1mL 玻璃比色皿和蒸馏水。

试剂组成和配制:

试剂一:液体×1瓶,4℃保存。

试剂二:液体×1瓶,4℃避光保存。

试剂三:液体×1瓶,4℃避光保存。

试剂四:液体×1瓶,4℃避光保存,未变成蓝绿色之前均可使用。

标准品:液体×1 支(EP 管中),2 μ mol/mL 酚标准液 ,4℃保存。

粗酶液提取:

1.    组织: 按照组织质量(g):试剂一体积(mL)为 1: 5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织, 加入 1mL 试剂一)进行冰浴匀浆 ,4℃ 、8000g 离心 10min,取上清液待测。

2.    细菌或细胞:按照细菌或细胞数量(104 个):试剂一体积(mL)为 500~1000: 1  的比  例(建议 500 万细胞加入 1mL 试剂一), 冰浴超声波破碎细胞(功率 300w,超声 3 秒, 间隔 7 秒,总时间3min);然后 8000g,4℃,离心 10min,取上清置于冰上待测。

3.    血液可直接测定,或者适当稀释后测定。

测定步骤:

1.  分光光度计预热 30min,调节波长到 510 nm,蒸馏水调零。

2.  试剂三置于 37℃水浴中预热 30 min。

3.  空白管: EP 管,加入 20μL 蒸馏水 ,200μL 试剂二 ,200μL 试剂三,混匀后置于37℃ 水浴中保温 15min;加入试剂四 600μL,混匀后于 510 nm测定吸光度,记为 A 空白管。

4.  标准管:  EP 管,加入 20μL 标准品 ,200μL 试剂二,200μL 试剂三,混匀后置于37℃ 水浴中保温 15min;加入试剂四 600μL,混匀后于 510 nm测定吸光度,记为 A 标准管。

5.对照管:  EP 管,加入 20μL 上清液 ,200μL 蒸馏水 ,200μL 试剂三,混匀后置 37℃ 水浴中保温 15min;加入试剂四 600μL,混匀后于 510 nm测定吸光度,记为 A 测定管。

6.  测定管: EP 管,加入 20μL 上清液 ,200μL 试剂二,200μL 试剂三,混匀后置于37℃ 水浴中保温 15min;加入试剂四 600μL,混匀后于 510 nm测定吸光度,记为 A 测定管。

注意:空白管和标准管只需测定一次。每个测定管设一个对照管。

AKP/ALP 活性计算:

1.    血液中 AKP/ALP 活力计算

活性单位定义:37℃中每毫升血液每分钟催化产生 1μmol 酚定义为 1 个酶活单位。

AKP/ALP 活力(μmol/min /mL)= [C 标准品×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管)×V 反 ] ÷V 样÷T=6.8×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管)

2.    组织、细菌或细胞中AKP/ALP 活性计算

(1)按照蛋白浓度计算

活性单位定义:37℃中每毫克蛋白每分钟催化产生 1 μ mol 酚定义为 1 个酶活单位。

AKP/ALP(μmol/min/mg  prot)=[C 标准品×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管)×V 反 ]÷(Cpr×V 样)÷T=6.8×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管) ÷Cpr

(2)按照样本质量计算

活性单位定义:37℃中每克组织每分钟催化产生 1 μ mol 酚定义为 1 个酶活单位。

AKP/ALP(μmol/min/g  鲜重)=[C 标准品×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A  空白管)×V 反 ]÷(W×V 样÷V 样总)÷T=6.8×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管) ÷W

(3)按照细菌或细胞数量计算

活性单位定义:37℃中每 104 个细菌或细胞每分钟催化产生 1 μ mol 酚定义为 1 个酶活单位。 

AKP/ALP (μmol/min/104   cell)=  [C 标准品×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管)×V 反  ]÷(细胞数量×V 样÷V 样总)÷T= 6.8×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管) ÷细胞数量

C 标准品:2μmol/mL;V 反总:反应体系总体积(mL), 1020μL=1.02 mL;  V 样:加入反  应体系中上清液体积(mL),0.020mL;V 样总:加入提取液体积,1mL;T:反应时间(min), 15 min。

注意事项:

1.试剂二、试剂三和试剂四均需避光保存。 

2.试剂四变蓝绿色后不能再使用。

3.加入试剂四后必须立即混匀,否则显色不完全。


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