产品名称:碱性磷酸酶(AKP/ALP)测试盒
产品规格:50管/24样,100管/48样
产品货号:YX-C-B002,YX-W-B002
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货号 |
产品名称 |
检测方法 |
规格 |
售价(元) |
YX-C-B002 |
碱性磷酸酶(AKP/ALP)测试盒 |
可见分光光度法 |
50管/24样 |
160 |
YX-W-B002 |
碱性磷酸酶(AKP/ALP)测试盒 |
微量法 |
100管/48样 |
300 |
碱性磷酸酶(AKP/ALP)活性检测试剂盒说明书(微量法)
注意:正式测定之前选择预期差异大的样本做预测定。
规格:100T/48S
产品内容:
提取液:液体 60mL×1 瓶,4℃保存。
试剂一:液体 5mL×1 瓶,4℃避光保存。
试剂二:液体 5mL×1 瓶,4℃避光保存。
试剂三:液体 15mL×1 瓶,4℃避光保存,变成蓝绿色不能使用。
标准品:液体 1mL×1 支,2μmol/mL 酚标准液,4℃保存。
产品说明:
AKP/ALP 是一种含锌的糖蛋白酶,在碱性环境中可水解各种天然及人工合成的磷脂单酯化合物。
AKP/ALP 广泛分布于人体各脏器中,以肝脏为主。
在碱性环境中,AKP/ALP 催化磷酸苯二钠生成游离酚;酚与 4-氨基安替比林和铁氰化钾反应红色亚醌衍生物,在 510nm 有特征光吸收;通过测定 510 nm 吸光度增加速率,来计算 AKP 活性。
试验中所需的仪器和试剂:
可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96 孔板、冰和蒸馏水。
操作步骤:
一、粗酶液提取:
称取约 0.1g 组织,加提取液 1mL 充分研磨,4℃、10000rpm 离心 10min,取上清液待测。血液可直接用于测定,或者适当稀释后用于测定。
二、测定步骤:
(1)分光光度计/酶标仪预热 30 min 以上,调节波长到 510 nm,蒸馏水调零。
(2)试剂二置于 37℃水浴中预热 30 min 以上。
试剂名称(μL) |
测定管 |
对照管 |
空白管 |
标准管 |
蒸馏水 |
- |
- |
4 |
- |
2μmol/mL 标准品 |
- |
- |
- |
4 |
上清液 |
4 |
- |
- |
- |
试剂一 |
40 |
40 |
40 |
40 |
试剂二 |
40 |
40 |
40 |
40 |
混匀后置于 37℃水浴中保温 15min |
||||
试剂三 |
120 |
120 |
120 |
120 |
上清液 |
- |
4 |
- |
- |
混匀后于 510 nm 测定吸光度,分别记为 A 测定管、A 对照管、A 空白管、A 标准管。 |
活性单位定义:37℃中每毫克蛋白每分钟催化产生 1 μmol 酚为一个酶活力单位。
AKP/ALP (U/mg prot)= [C 标准品×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管)×V 样]÷(Cpr×V 样)÷T
=0.133×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管) ÷Cpr
(2)按样本鲜重计算
活性单位定义:37℃中每克组织每分钟催化产生 1 μmol 酚为一个酶活力单位。
AKP/ALP (U/g 鲜重)= [C 标准品×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管)×V 样] ÷(W÷V 提取×V 样)÷T
=0.133×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管)÷W
(3)按液体体积计算
活性单位定义:37℃中每毫升血液每分钟催化产生 1μmol 酚为一个酶活力单位。
AKP/ALP (U/mL)= [C 标准品×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管)×V 样] ÷V 样÷T
=0.133×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管)
C 标准品:2μmol/mL;V 反总:反应体系总体积(mL),204μL=0.204mL; V 样:加入反应体系中上清液体积(mL),0.004mL;T:反应时间(min),15 min;V 提取:加入提取液体积,1mL; W:样本鲜重,g;Cpr:样本蛋白浓度,mg/mL。
注意事项:
1、 试剂一、试剂二和试剂三均需避光保存。
2、 试剂三变蓝绿色后不能再使用。
3、 加入试剂三后必须立即混匀,否则显色不完全。
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