产品内容：
试剂一：液体 60mL×2 瓶，4℃保存； 

试剂二：液体 2mL ×1 瓶，4℃保存；
试剂三：粉剂×1 瓶，-20℃保存，临用前加入 20mL 试剂一； 

试剂四：粉剂×1 支，-20℃保存，临用前加入 1.5mL 试剂二；
标准品：液体 0.5mL×1 支，4℃保存。10umol/mL 谷氨酸标准品。
产品说明：
Glu 广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，不仅是组成蛋白质的 20 种氨基酸之一，而且通过转氨基作用参与多种氨基酸合成，是生物体内主要氨基来源之一。此外，Glu 还是味精的主要有效成分，常用做食品添加剂以及香料生产。
谷氨酸脱氢酶（GDH）催化谷氨酸和 NAD 生成α-酮戊二酸、NADH 和 NH4+，引起 340nm 处吸光度的上升，通过测定 340nm 吸光度的变化，计算谷氨酸含量。
需自备的仪器和用品：
紫外分光光度计/酶标仪、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔 UV 板、研钵、冰、蒸馏水。
操作步骤：

一、谷氨酸提取：
细菌、细胞或组织样品：收集细胞或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照每 500 万细菌或细胞加入 1mL 试剂一，超声波破碎细菌或细胞（功率 20％，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次），10000rpm，常温离心 10min，取上清待测。
称取约 0.1g 组织，加入 1mL 试剂一进行冰浴匀浆，10000rpm，常温离心 10min，取上清待测。

二、测定步骤
1、分光光度计/酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 340nm，蒸馏水调零。
2、标准溶液的制备
将标准品分别稀释为 0.625、0.313、0.156、0.078、0.039μmol/mL 的标准溶液。
3、在有盖 EP 管中加入下列试剂：
（1） 标准管：在微量石英比色皿/96 孔 UV 板中加入 40μL 标准溶液、160μL 试剂三和 10μL 试剂四混匀，立即记录 340nm 处 20s 时的吸光值为 A1 和 5min20s 时的吸光值 A2，计算∆A=A2-A1。
（2） 测定管：在微量石英比色皿/96 孔 UV 板中加入 40μL 样本、160μL 试剂三和 10μL 试剂四混匀，立即记录 340nm 处 20s 时的吸光值为 A1 和 5min20s 时的吸光值 A2，计算∆A=A2-A1。

三、谷氨酸含量计算：

1、标准曲线的绘制：
以谷氨酸含量（µmol/mL）为 x 轴，标准管∆A 为 y 轴，绘制标准曲线 y=kx+b。将测定管∆A 带入方程得到 x 值。
2、氨基酸含量计算：
（1） 按照蛋白浓度计算
谷氨酸含量（µmol/mg）=x×V 样本÷（Cpr×V 样本）=x÷Cpr。
（2） 按照样品鲜重计算
谷氨酸含量（µmol/g 鲜重）=x×V 样本÷（W÷V 样总×V 样本）=x÷W。
（3） 按照细菌或细胞数量计算
谷氨酸含量（μmol/104 cell）＝x×V 样本÷（500÷V 样总×V 样本）=0.002x。
V 样总：加入提取液体积，1mL；V 样本：加入的样本体积，0.04mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；
W：样本鲜重，g；500：细菌或细胞总数，500 万。

注意事项：

为提高检测灵敏度，测定管的吸光值应小于 1 且∆A 小于 0.4，若大于此值则需要将上清液用试剂一稀释至适当倍数后测定。