产品名称:植物脱氢酶(pDHA)测试盒
产品规格:50管/48样,100管/96样
产品货号:YX-C-C102,YX-W-C102
免费咨询:0551-66107970
货号 |
产品名称 |
检测方法 |
规格 |
售价(元) |
YX-C-C102 |
脱氢酶(pDHA)测试盒 |
可见分光光度法 |
50管/24样 |
600 |
YX-W-C102 |
脱氢酶(pDHA)测试盒 |
微量法 |
100管/48样 |
1150 |
植物脱氢酶(Plant dehydrogenase, pDHA) 试剂盒说明书(可见分光光度法)
注意:正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。
规格:50 管/24 样
测定意义
生物体的脱氢酶(Plant dehydrogenase , DHA)的活性在很大程度上反映了生物体的活性 状态,能直接表示生物细胞对其基质降解能力的强弱。
测定原理
受氢体 2,3,5-氯化三苯基四氮唑 (2,3,5-Triphenyl Tetrazolium Chloride,即 TTC) 在细胞呼吸过程中接受氢以后,其还原产物三苯基甲鐟 (TriphenylFormazone,即 TF) 呈现 红色,在波长 485nm 处有最大吸收峰,测定其 485nm 吸光值,即得植物脱氢酶活性。
需自备实验仪器及用品
恒温培养箱或水浴锅、低温离心机、研钵、滤纸、可见分光光度计、1mL 比色皿、冰、蒸 馏水和乙酸乙酯 (不允许快递,请用户自备)。
试剂的组成和配制
试剂一:粉剂×2 瓶,使用前加少量水溶解,定容至 60mL,避光、4℃保存 (尽量现配现用)
试剂二:液体 60mL×6,4℃保存。
试剂三:乙酸乙酯, 自备。
样品处理
称取 0.5-1g 的植物组织,用双蒸水清洗 3-4 次,用滤纸吸干水分,备用。
测定步骤和操作表
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对照管 |
测定管 |
样品 (g) |
0.5-1 |
0.5-1 |
试剂一 (mL) |
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5 |
试剂二 (mL) |
10 |
5 |
充分混匀,37℃ ,暗培养 3h,取出后立即冰浴 5min,过滤,去滤液,尽量用滤纸吸干样品, 置于研钵中。 |
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试剂三 (mL) |
5 |
5 |
充分研磨,吸取红色液体于离心管中,用少量试剂三冲洗研钵,一起加入离心管,用试剂三 定容至 15mL,10000rpm/min,4℃,离心 5min,取上清,于 1cm 光径,蒸馏水调零,测定 OD485 。 |
脱氢酶活力计算
酶活单位定义:
在 37℃时,每小时每克样品使反应体系 OD 值每增加 0.01 为一个酶活单位。
计算公式:脱氢酶活性 (U/g ·h) = (OD485 测定-OD485 对照) ÷0.01 ÷样品质量(g) ÷反应时间 (h)
注意事项
1. 配制好的试剂一避光保存于 4℃ ,尽量在一周内使用,若出现红色,则不能使用。
2. 试剂三易挥发,有毒,为了您的健康,请穿实验服,戴口罩,戴乳胶手套操作。
3. 反应完成后立即冰浴以终止反应,并去除干净残留的反应液。
4. 如果测定出来的吸光值较大,需把样品适当稀释再进行测定。
5. 试剂盒 2-8℃保存。
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