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产品名称:亚硝酸还原酶(NiR)检测试剂盒

产品规格:50管/24样,100管/48样

产品货号:YX-C-A813,YX-W-A813

产品报价:

免费咨询:0551-66107970

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货号

产品名称

检测方法

规格

售价(元)

YX-C-A813

亚硝酸还原酶(NiR)测试盒

可见分光光度法

50/24

650

YX-W-A813

亚硝酸还原酶(NiR)测试盒

微量法

100管/48样

1250

亚硝酸还原酶( NiR)活性检测试剂盒说明书(微量法

注意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

规格:100T/48S

产品内容:

试剂一: 液体112mL×1瓶,4℃保存。

试剂二: 液体1.5mL×1瓶,4℃保存。

试剂三: 液体1mL×1支,4℃保存。

试剂四: 粉剂×1支,4℃避光保存。临用前加0.6mL蒸馏水溶解。

试剂五: 粉剂×1瓶,4℃避光保存。临用前加3.2mL蒸馏水溶解。

显色剂A:液体2mL×1瓶,4℃避光保存。

显色剂B:液体2mL×1瓶,4℃避光保存。

临用前根据用量将显色剂A和显色剂B以1:1的比例混合。

产品说明:

硝酸还原酶(NiR)是一类能催化亚硝酸盐还原的酶,广泛存在于微生物及植物体内,是自然 界氮循环过程中的关键酶,可以将亚硝酸盐降解为NO或NH3 ,从而减少环境中的亚硝态氮的积累, 降低因亚硝酸盐累积而造成的对生物体的毒害作用。

亚硝酸还原酶可将NO2—还原为NO ,使样品中参与重氮化反应生成紫红色化合物的NO2—减少, 即540nm处吸光值的变化可反应亚硝酸还原酶的活性。

自备实验用品及仪器:

天平、低温离心机、研钵、可见分光光度计/酶标仪、微量比色皿/96孔板、水浴锅。

操作步骤:

一、酶液提取

1 组织:按照组织质量(g):试剂一体积(mL)为1:5~ 10的比例(建议称取约0. 1g组织,加入1mL 试剂一)进行冰浴匀浆,然后10000g 4℃离心10min ,取上清,置冰上待测。

、细菌、真菌:按照细胞数量(104个) :试剂一体积(mL)为500~ 1000:1的比例(建议500万细 胞加入1mL试剂一) ,冰浴超声波破碎细胞(功率300w ,超声3秒,间隔7秒,总时间3min );然后 10000g 4℃ ,离心10min ,取上清置于冰上待测。

二、测定操作表

 

空白管

对照管

测定管

试剂一(μL)

140

120

110

试剂二(μL)

12

12

12

试剂三(μL)

10

 

10

试剂四(μL)

6

6

6

试剂五(μL)

32

32

32

样品(μL)

 

30

30

混匀后,37℃反应1h

显色剂(μL)

40

40

40

充分混匀,25℃静置显色10min ,蒸馏水调零,于微量比色皿/96孔板中测定540nm  处各管 吸光值,记为A空白管、A  对照管和A  测定管。

注意: 空白管只要做一管

三、计算公式:

1使用微量比色皿测定的计算公式如下:  

标准曲线: y=0.0136x-0.005 ,R2=0.9981;

1按照蛋白含量计算

酶活性定义: 每毫克组织蛋白每小时还原1μmol NO2 的量为一个酶活力单位。

NiR(μmol/h /mg prot)=[ A空白管-(A测定管-A对照管) +0.005] ÷0.0136×V反总÷ V样×Cpr)÷T = 490.2×[ A空白管-(A测定管-A对照管) +0.005] ÷Cpr

2按照样本质量计算

酶活性定义: 每克组织每小时还原1μmol NO2 的量为一个酶活力单位。

NiR(μmol/h /g鲜重) =[ A空白管-(A测定管-A对照管) +0.005] ÷0.0136×V反总÷ W×V样÷V样总) ÷T= 490.2×[ A空白管- A测定管-A对照管) +0.005] ÷W

3按照细胞数量计算

酶活性定义: 104细胞每小时还原1μmol NO2 的量为一个酶活力单位。

NiR(μmol/h /104 cell)=[ A空白管-(A测定管-A对照管) +0.005] ÷0.0136×V反总÷(细胞数量×V样 ÷V样总) ÷T= 490.2×[ A空白管- A测定管-A对照管) +0.005] ÷细胞数量

V反总: 反应体系总体积,0.2mL;V样: 体系中加入样本体积,0.03mL; V  样总: 加入提取

液体积,1mL;W:样本质量,g;T:反应时间,1h;Cpr:样本蛋白含量。

2、96孔板测定的计算公式如下

标准曲线: y=0.0068x-0.005 R2=0.9981;

(1)按照蛋白含量计算

酶活性定义: 每毫克组织蛋白每小时还原1μmol NO2 的量为一个酶活力单位。

NiR(μmol/h /mg prot)=[ A空白管-(A测定管-A对照管) +0.005] ÷0.0068×V反总÷ V样×Cpr)÷T = 980.4×[ A空白管-(A测定管-A对照管) +0.005] ÷Cpr

(2)按照样本质量计算

酶活性定义: 每克组织每小时还原1μmol NO2 的量为一个酶活力单位。

NiR(μmol/h /g 鲜重) =[ A空白管-(A测定管-A对照管) +0.005] ÷0.0068×V反总÷ W×V样÷V样总)

÷T= 980.4×[ A空白管- A测定管-A对照管) +0.005] ÷W

(3)按照细胞数量计算

酶活性定义: 104细胞每小时还原1μmol NO2 的量为一个酶活力单位。

NiR(μmol/h /104 cell)=[ A空白管-(A测定管-A对照管) +0.005] ÷0.0068×V反总÷(细胞数量×V样÷V样总) ÷T= 980.4×[ A空白管- A测定管-A对照管) +0.005] ÷细胞数量

V反总: 反应体系总体积,0.2mL;V样: 体系中加入样本体积,0.03mL; V  样总: 加入提取液体积,1mL;W:样本质量,g;T:反应时间,1h;Cpr:样本蛋白含量。

注意事项:

1 、配置好的试剂三、试剂四3天内使用完。


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