产品名称:亚硝酸还原酶(NiR)检测试剂盒
产品规格:50管/24样,100管/48样
产品货号:YX-C-A813,YX-W-A813
免费咨询:0551-66107970
货号 |
产品名称 |
检测方法 |
规格 |
售价(元) |
YX-C-A813 |
亚硝酸还原酶(NiR)测试盒 |
可见分光光度法 |
50管/24样 |
650 |
YX-W-A813 |
亚硝酸还原酶(NiR)测试盒 |
微量法 |
100管/48样 |
1250 |
亚硝酸还原酶( NiR)活性检测试剂盒说明书(微量法)
注意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
规格:100T/48S
产品内容:
试剂一: 液体112mL×1瓶,4℃保存。
试剂二: 液体1.5mL×1瓶,4℃保存。
试剂三: 液体1mL×1支,4℃保存。
试剂四: 粉剂×1支,4℃避光保存。临用前加0.6mL蒸馏水溶解。
试剂五: 粉剂×1瓶,4℃避光保存。临用前加3.2mL蒸馏水溶解。
显色剂A:液体2mL×1瓶,4℃避光保存。
显色剂B:液体2mL×1瓶,4℃避光保存。
临用前根据用量将显色剂A和显色剂B以1:1的比例混合。
产品说明:
硝酸还原酶(NiR)是一类能催化亚硝酸盐还原的酶,广泛存在于微生物及植物体内,是自然 界氮循环过程中的关键酶,可以将亚硝酸盐降解为NO或NH3 ,从而减少环境中的亚硝态氮的积累, 降低因亚硝酸盐累积而造成的对生物体的毒害作用。
亚硝酸还原酶可将NO2—还原为NO ,使样品中参与重氮化反应生成紫红色化合物的NO2—减少, 即540nm处吸光值的变化可反应亚硝酸还原酶的活性。
自备实验用品及仪器:
天平、低温离心机、研钵、可见分光光度计/酶标仪、微量比色皿/96孔板、水浴锅。
操作步骤:
一、酶液提取
1 、组织:按照组织质量(g):试剂一体积(mL)为1:5~ 10的比例(建议称取约0. 1g组织,加入1mL 试剂一)进行冰浴匀浆,然后10000g ,4℃离心10min ,取上清,置冰上待测。
2 、细菌、真菌:按照细胞数量(104个) :试剂一体积(mL)为500~ 1000:1的比例(建议500万细 胞加入1mL试剂一) ,冰浴超声波破碎细胞(功率300w ,超声3秒,间隔7秒,总时间3min );然后 10000g ,4℃ ,离心10min ,取上清置于冰上待测。
二、测定操作表
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空白管 |
对照管 |
测定管 |
试剂一(μL) |
140 |
120 |
110 |
试剂二(μL) |
12 |
12 |
12 |
试剂三(μL) |
10 |
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10 |
试剂四(μL) |
6 |
6 |
6 |
试剂五(μL) |
32 |
32 |
32 |
样品(μL) |
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30 |
30 |
混匀后,37℃反应1h |
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显色剂(μL) |
40 |
40 |
40 |
充分混匀,25℃静置显色10min ,蒸馏水调零,于微量比色皿/96孔板中测定540nm 处各管 吸光值,记为A空白管、A 对照管和A 测定管。 |
注意: 空白管只要做一管
三、计算公式:
1、使用微量比色皿测定的计算公式如下:
标准曲线: y=0.0136x-0.005 ,R2=0.9981;
(1)按照蛋白含量计算
酶活性定义: 每毫克组织蛋白每小时还原1μmol NO2— 的量为一个酶活力单位。
NiR(μmol/h /mg prot)=[ A空白管-(A测定管-A对照管) +0.005] ÷0.0136×V反总÷ (V样×Cpr)÷T = 490.2×[ A空白管-(A测定管-A对照管) +0.005] ÷Cpr
(2)按照样本质量计算
酶活性定义: 每克组织每小时还原1μmol NO2— 的量为一个酶活力单位。
NiR(μmol/h /g鲜重) =[ A空白管-(A测定管-A对照管) +0.005] ÷0.0136×V反总÷ (W×V样÷V样总) ÷T= 490.2×[ A空白管- (A测定管-A对照管) +0.005] ÷W
(3)按照细胞数量计算
酶活性定义: 每104细胞每小时还原1μmol NO2— 的量为一个酶活力单位。
NiR(μmol/h /104 cell)=[ A空白管-(A测定管-A对照管) +0.005] ÷0.0136×V反总÷(细胞数量×V样 ÷V样总) ÷T= 490.2×[ A空白管- (A测定管-A对照管) +0.005] ÷细胞数量
V反总: 反应体系总体积,0.2mL;V样: 体系中加入样本体积,0.03mL; V 样总: 加入提取
液体积,1mL;W:样本质量,g;T:反应时间,1h;Cpr:样本蛋白含量。
2、用96孔板测定的计算公式如下
标准曲线: y=0.0068x-0.005 ,R2=0.9981;
(1)按照蛋白含量计算
酶活性定义: 每毫克组织蛋白每小时还原1μmol NO2— 的量为一个酶活力单位。
NiR(μmol/h /mg prot)=[ A空白管-(A测定管-A对照管) +0.005] ÷0.0068×V反总÷ (V样×Cpr)÷T = 980.4×[ A空白管-(A测定管-A对照管) +0.005] ÷Cpr
(2)按照样本质量计算
酶活性定义: 每克组织每小时还原1μmol NO2— 的量为一个酶活力单位。
NiR(μmol/h /g 鲜重) =[ A空白管-(A测定管-A对照管) +0.005] ÷0.0068×V反总÷ (W×V样÷V样总)
÷T= 980.4×[ A空白管- (A测定管-A对照管) +0.005] ÷W
(3)按照细胞数量计算
酶活性定义: 每104细胞每小时还原1μmol NO2— 的量为一个酶活力单位。
NiR(μmol/h /104 cell)=[ A空白管-(A测定管-A对照管) +0.005] ÷0.0068×V反总÷(细胞数量×V样÷V样总) ÷T= 980.4×[ A空白管- (A测定管-A对照管) +0.005] ÷细胞数量
V反总: 反应体系总体积,0.2mL;V样: 体系中加入样本体积,0.03mL; V 样总: 加入提取液体积,1mL;W:样本质量,g;T:反应时间,1h;Cpr:样本蛋白含量。
注意事项:
1 、配置好的试剂三、试剂四3天内使用完。
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