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产品名称:碳酸酐酶(CA)试剂盒

产品规格:50管/48样,100管/96样

产品货号:LE-1-377,LE-2-377

产品报价:

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货号

产品名称

检测方法

规格

售价(元)

LE-1-377

碳酸酐酶(CA)测试盒

可见分光光度法

50/48

580

LE-2-377

碳酸酐酶(CA)测试盒

微量法

100管/96

1100

碳酸酐酶(CA)试剂盒说明书(可见分光光度法

测定意义:

碳酸酐酶(Carbonic Anhydrase,CA)是一种含锌金属酶,迄今在哺乳动物体内已发现至少有11种同工酶,它们的结构、分布、性质各异,多与各种上皮细胞泌H-和碳酸氢盐有关,通过催化CO2水化反应及某些脂、醛类水化反应,参与多种离子交换 ,维持机体内环境稳态。

测定原理:

碳酸酐酶具有酯酶活性,可催化乙酸对硝基苯酯反应生成对硝基苯酚,通过检测 405nm 处吸光值上升速率反映碳酸酐酶活性。

需自备的仪器和用品:

分光光度计、水浴锅、可调式移液器、1mL 玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。

试剂的组成和配制:

提取液:液体 60mL×1 瓶,4℃保存; 

试剂一:液体 40mL×1 瓶,4℃保存;

试剂二:粉剂×1 瓶,-20℃避光保存;临用前加入 12mL 试剂三,充分溶解待用,用不完的试剂继续-20℃避光保存。

试剂三:液体 15mL×1 瓶,4℃保存。

样品测定的准备:

1、细菌或细胞的处理:收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104 个):提取液体积(mL)为 500~1000:1 的比例(建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率 20%或 200W,超声 3S,间隔 10S,重复30 次);8000g,4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。

2、组织的处理:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL 提取液),冰浴中匀浆。8000g ,4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。

测定步骤:

1、分光光度计预热 30min,调节波长至 405nm,蒸馏水调零。

2、试剂一、试剂二提前 25℃预热 10min。

3、取 1mL 玻璃比色皿,依次加入 100μL 样本上清,700μL 试剂一,最后加入 200μL 试剂二。立刻混匀,测定 405nm 下 3min 处吸光值A1  与 6min 处吸光值 A2,ΔA=A2-A1

CA 活力计算:

标准条件下测定回归方程为 y = 2.0848x + 0.001,R2 = 0.9994;x 为标准品浓度(μmol/mL),y 为吸光值。

1、按照蛋白浓度计算

单位的定义:每 mg 组织蛋白每分钟催化产生 1nmol 对硝基酚定义为一个酶活力单位。
CA 活性(nmol/min/mg prot)=(ΔA-0.001) ÷2.0848×V 样÷(V 样×Cpr)÷T×1000

=159.89×(ΔA-0.001) ÷Cpr
2、按样本鲜重计算
单位的定义:每 g 组织每分钟催化产生 1nmol 对硝基酚定义为一个酶活力单位。
CA 活性(nmol/min/g 鲜重)=(ΔA-0.001) ÷2.0848×V 样÷(W ×V 样÷V 样总)÷T×1000
=159.89×(ΔA-0.001) ÷W
3、按细菌或细胞密度计算
单位的定义:每 1 万个细菌或细胞每分钟催化产生 1nmol 对硝基酚定义为一个酶活力单位。
CA 活性(nmol/min/104 cell)=(ΔA-0.001) ÷2.0848×V 样÷(500 ×V 样÷V 样总)÷T×1000
=0.319×(ΔA-0.001)

      V 样:加入样本体积:0.1mL;V 样总:加入提取液体积,1 mL;Cpr:样本蛋白质浓度, mg/mL;W:样本质量,g;500:细菌或细胞总数,500 万;T:反应时间,3min;1000,μmol 到 nmol 的换算系数。


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