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产品名称:乙酰胆碱酯酶(AchE)测试盒

产品规格:50管/48样,100管/96样

产品货号:LE-1-362,LE-2-362

产品报价:

免费咨询:0551-66107970

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货号

产品名称

检测方法

规格

售价(元)

LE-1-362

乙酰胆碱酯酶(AchE)测试盒

可见分光光度法

50/48

200

LE-2-362

乙酰胆碱酯酶(AchE)测试盒

微量法

100/96

380

乙酰胆碱酯酶AchE)活性测定试剂盒(微量法

产品内容:

试剂一:液体×1 瓶,4℃保存。

试剂二:液体×1 瓶,4℃保存。

试剂三:粉剂×1 瓶,4℃保存。临用前加入 1.3mL 试剂二,充分震荡溶解。

试剂四:粉剂×1 瓶,4℃保存。临用前加入 1.3mL 试剂二,充分震荡溶解。

产品说明:

AchE 属于丝氨酸水解酶,广泛存在于各种动物组织和血清中。AchE 催化乙酰胆碱(Ach)水解,在神经传导调节中起重要作用。

AchE 催化 Ach 水解生成胆碱,胆碱与二硫对硝基苯甲酸(DTNB)作用生成 5-巯基-硝基苯甲酸(TNB);TNB 412nm 处有吸收峰,通过测定 412 nm 吸光度增加速率,计算 AchE 活性。

自备仪器和用品:

可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板、低温离心机、水浴锅、可调式移液枪和蒸馏水。

操作步骤:

一、粗酶液提取:

1.  组织:按照组织质量g):提取液体积(mL) 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL提取液)进行冰浴匀浆,8000g 4℃离心 10min,取上清液待测。

2.  细菌、真菌:按照细胞数量(10个):试剂一体积(mL) 500~1000:1 的比例(建议 500 万细胞加入 1mL 提取液),冰浴超声波破碎细胞(功率 300w,超声 3 秒,间隔 7 秒,总时间 3min);然后 8000g,4℃,离心 10min,取上清置于冰上待测。

3.  血清等液体:直接测定。

二、测定操作:

1.  分光光度计预热 30 min,调节波长到 412 nm,蒸馏水调零。

2.  试剂二置于 37℃水浴中预热 30min。

3.  空白管:取微量石英比色皿/96 孔板,依次加入 20μL 蒸馏水、160 μL 试剂二、10μL 试剂三和 10μL 试剂四,迅速混匀,于 412nm 处测定 3min 内吸光值变化,第 10s 吸光值记为 A1,第 190s 吸光值记为 A2。△A 空白管=A2-A1

4.  测定管:取微量石英比色皿/96 孔板,依次加入 20μL 上清、160 μL 试剂二、10μL 试剂三和 10μL 试剂四,迅速混匀,于 412nm 处测定 3min 内吸光值变化,第 10s 吸光值记为 A3,第 190s 吸光值记为 A4。△A 空白管=A4-A3

注意:空白管只需测定一次。

三、AchE 活性计算公式:

a. 使用微量石英比色皿测定的计算公式如下

1. 组织 AchE 活性

(1)按照蛋白浓度计算

活性单位定义:每毫克蛋白每分钟催化产生 1nmol TNB 的酶量为 1 个酶活单位。

AchE 酶活(nmol/min/mg prot)= [(△A 测定管-△A 空白管)÷ε÷d×V 反总×109]÷(Cpr ×V 样)÷T= 245×(△A 测定管-△A 空白管)÷Cpr

(2)按照样本质量计算

活性单位定义:每克组织每分钟催化产生 1nmol TNB 的酶量为 1 个酶活单位。

AchE 酶活(nmol/min/g)= [(△A 测定管-△A 空白)÷ε÷d×V 反总×109]÷(W ×V 样÷V 样总)÷T= 245×(△A 测定管-△A 空白管)÷W

2.  细菌、细胞 AchE 活性

活性单位定义:每 104 个细胞每分钟催化产生 1nmol TNB 的酶量为 1 个酶活单位。

AchE 酶活(nmol/min/104 cell)= [(△A 测定管-△A 空白)÷ε÷d×V 反总×109]÷(细胞数量×V 样÷V 样总)÷T = 245×(△A 测定管-△A 空白管)÷细胞数量

3. 血清 AchE 活性

活性单位定义:每毫升血清每分钟催化产生 1nmol TNB 的酶量为 1 个酶活单位。

AchE 酶活(nmol/min /mL)= [(△A 测定管-△A 空白管)÷ε÷d×V 反总×109]÷×V 样÷T =245×(△A 测定管-△A 空白管)÷Cpr

    ε:TNB 摩尔消光系数,13.6×103 L/mol/cm;d:比色皿光径,1 cm;V 反总:反应体系总体积(L),200μL=2×10-4L;V 样总:提取液体积,1 mL;106:1mol=1×106μmol;Cpr:蛋白浓度(mg/mL)样:加入上清液体积(mL)0.02 mLW  :样品质量;T:反应时间(min)3 min。

b. 使用 96 孔板测定的计算公式如下

1. 组织 AchE 活性

(1) 按照样本质量计算

活性单位定义:每克组织每分钟催化产生 1nmol TNB 的酶量为 1 个酶活单位。

AchE 酶活(nmol/min/g)= [(△A 测定管-△A 空白)÷ε÷d×V 反总×109]÷( W ×V 样÷V 样总÷T = 490×(△A 测定管-△A 空白管)÷Cpr

(2) 按照蛋白浓度计算

活性单位定义:每毫克蛋白每分钟催化产生 1nmol TNB 的酶量为 1 个酶活单位。

AchE 酶活(nmol/min/mg prot)= [(△A 测定管-△A 空白管)÷ε÷d×V 反总×109]÷( Cpr ×V 样÷T= 490×(△A 测定管-△A 空白管)÷W

2. 细菌、细胞 AchE 活性

活性单位定义:每 104 个细胞每分钟催化产生 1nmol TNB 的酶量为 1 个酶活单位。

AchE 酶活(nmol/min/104  cell)= [(△A 测定管-△A 空白)÷ε÷d×V 反总×109]÷(细胞数量×V ÷V 样总)÷T = 490×(△A 测定管-△A 空白管)÷细胞数量

3. 血清 AchE 活性

活性单位定义:每毫升血清每分钟催化产生 1nmol TNB 的酶量为 1 个酶活单位。

AchE 酶活(nmol/min /mL)= [(△A 测定管-△A 空白管)÷ε÷d×V 反总×109]÷×V 样÷T =490×(△A 测定管-△A 空白管)÷Cpr

ε:TNB 摩尔消光系数,13.6×103  L/mol/cm;d:比色皿光径,0.5 cm;V 反总:反应体系总体积(L) 200μL=2×10-4L;V 样总:提取液体积,1 mL;1061mol=1×106μmolCpr:蛋白浓度(mg/mL)样:加入上清液体积(mL)0.02 mLW  :样品质量;T:反应时间(min)3 min


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