铜蓝蛋白(Ceruloplasmin ，Cp)测定试剂盒说明书(微量法)

货号：LE-2-171

正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定

测定意义：

铜蓝蛋白是血浆的含铜蛋白，有运输铜的功能，同时具有氧化酶的活性，是细胞外液重要的抗氧化剂。

测定原理：

铜蓝蛋白催化 3,3’,5,5’-四甲基联苯胺生成蓝色产物，在 645nm处有特征吸收峰，依此可得铜蓝蛋白活性。

试剂组成和配制:

试剂一：液体 10mL×1 瓶，4℃保存。

试剂二：液体 7mL×1 瓶，4℃保存。

试剂三：液体 15mL×1 瓶，4℃避光保存。（使用前 37℃预热）

自备仪器和用品：

天平 、可见分光光度计/酶标仪 、微量石英比色皿/96 孔板和蒸馏水。

测定操作表

1、分光光度计/酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 645nm，蒸馏水调零。

2、操作表

计算公式:

a.   用微量石英比色皿测定的计算公式如下

1、按体积计算

酶活定义:37℃条件下，每分钟每毫升样品与底物作用吸光度升高 0.01 为一个酶活单位。 

Cp 活力（U/ml）=ΔA×V 反总÷0.01÷V 样÷T

= 33.33×ΔA

2、按鲜重计算

单位定义：37℃条件下，每分钟每克样品与底物作用吸光值升高 0.01 为一个酶活单位。 

Cp 活力（U/g 鲜重）=ΔA×V 反总÷0.01÷（W ×V 样÷V 样总）÷T

= 33.33×ΔA÷W

3、按蛋白浓度计算

单位定义：37℃条件下，每分钟每毫克蛋白样品与底物作用吸光值升高 0.01 为一个酶活单位。 

Cp 活力（U/ mg prot）=ΔA×V 反总÷0.01÷（ Cpr×V 样）÷T

= 33.33×ΔA÷Cpr

V 样：0.03 ml；V 反总：0.3 ml；T：反应时间，30min；V 样总：加入提取液体积，1ml；  Cpr：样本蛋白质浓度，mg/ml；W：样本质量，g

b.  用微量石英比色皿测定的计算公式如下

1、按体积计算

酶活定义:37℃条件下，  每分钟每毫升样品与底物作用吸光度升高 0.005 为一个酶活单位。 

Cp 活力（U/ml）=ΔA×V 反总÷0.005÷V 样÷T

= 66.66×ΔA

2、按鲜重计算

单位定义：37℃条件下，每分钟每克样品与底物作用吸光值升高 0.005 为一个酶活单位。

Cp 活力（U/g 鲜重）=ΔA×V 反总÷0.005÷（W ×V 样÷V 样总）÷T

= 66.66×ΔA÷W

3、按蛋白浓度计算

单位定义：37℃条件下，每分钟每毫克蛋白样品与底物作用吸光值升高 0.005 为一个酶活单位。 

Cp 活力（U/ mg prot）=ΔA×V 反总÷0.005÷（ Cpr×V 样）÷T

= 66.66×ΔA÷Cpr

V 样：0.03 ml；V 反总：0.3 ml；T：反应时间，30min；V 样总：加入提取液体积，1ml；  Cpr：样本蛋白质浓度，mg/ml；W：样本质量，g

注意事项:

试剂二和试剂三有一定的毒性和刺激性，请操作时做好防护措施。