葡萄糖氧化酶活性检测试剂盒说明书（微量法）

注意：正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定

产品内容：

提取液：液体 100mL×1 瓶，4℃保存；

试剂一：液体 15mL×1 瓶，4℃保存；

试剂二：液体 3mL×1 瓶，4℃保存；

试剂三：液体 1mL×1 支，-20℃保存，融化后可分装保存。

产品说明：

GOD（EC 1.1.3.4）广泛存在于动物和植物中，催化葡萄糖氧化生成葡萄糖酸，并产生 H2O2， 是生物体中产生活性氧的代谢途径之一。

GOD 催化葡萄糖产生 H2O2，过氧化物酶在有氧存在时催化 H2O2 分解产生的氧又将邻联茴香胺氧化生成有色物质，颜色深浅与葡萄糖氧化酶活性成线性关系。

试验中所需的仪器和设备：

可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量比色皿/96 孔板、研钵、冰和蒸馏水

操作步骤：

一、样品测定的准备

1、组织处理：称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液进行冰浴匀浆；8000g 4℃离心 10min，取上清， 置冰上待测。

2、血清（浆）：直接检测。

二、测定步骤

1、分光光度计或酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 500nm，蒸馏水调零。

2、GOD 工作液的配制：取 15mL 试剂一加 3mL 试剂二混匀，调 PH 至 5.1（现配现用）。

3、加样表：

样品测定前将 GOD 工作液与试剂三放入 37℃水浴中保温，然后将上述试剂按顺序加入微量比色皿/96 孔板中，加样本的同时开始计时；在 500 nm 波长下记录 20 秒时的初始吸光度 A1 及 1 分20 秒时的吸光度 A2。计算ΔA=A2-A1。

三、GOD 活力单位的计算

用微量玻璃比色皿测定的计算公式如下

1、动物组织 GOD 活力的计算

按蛋白浓度计算

单位的定义：每 mg 组织蛋白在反应体系中每分钟催化产生 1μmol 氧化型邻联茴香胺定义为一个酶活力单位。

GOD（U/mg prot）=ΔA÷(ε×d)×V 反总÷(Cpr×V 样)÷T=1333×ΔA÷Cpr

按样本鲜重计算

单位的定义：每 g 组织在反应体系中每分钟催化产生 1μmol 氧化型邻联茴香胺定义为一个酶活力单位。

GOD（U/g 鲜重）=ΔA÷(ε×d)×V 反总÷(W÷V 提取×V 样)÷T=1333×ΔA÷W

2、血清（浆）GOD 活力的计算

单位的定义：每 mL 血清（浆）在反应体系中每分钟催化产生 1μmol 氧化型邻联茴香胺定义为一个酶活力单位。

GOD（U/mL）=ΔA÷(ε×d)×V 反总÷T÷V 样本=1333×ΔA

V 反总：反应总体积，0.2mL；V 样本：加入样本体积，0.02mL；V 提取，加入提取液体积， 1mL；cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；W：样本鲜重，g；d：光径，1cm；ε：氧化型邻联茴香胺消光系数，7.5×10-3mL/μmol/cm；T：反应时间，1min。

用 96 孔板测定的计算公式如下

1、动物组织 GOD 活力的计算

按蛋白浓度计算

单位的定义：每 mg 组织蛋白在反应体系中每分钟催化产生 1μmol 氧化型邻联茴香胺定义为一个酶活力单位。

GOD（U/mg prot）=ΔA÷(ε×d)×V 反总÷(Cpr×V 样)÷T=2222×ΔA÷Cpr

按样本鲜重计算

单位的定义：每 g 组织在反应体系中每分钟催化产生 1μmol 氧化型邻联茴香胺定义为一个酶活力单位。

GOD（U/g 鲜重）=ΔA÷(ε×d)×V 反总÷(W÷V 提取×V 样)÷T=2222×ΔA÷W

2、血清（浆）GOD 活力的计算

单位的定义：每 mL 血清（浆）在反应体系中每分钟催化产生 1μmol 氧化型邻联茴香胺定义为一个酶活力单位。

GOD（U/mL）=ΔA÷(ε×d)×V 反总÷T÷V 样本=2222×ΔA

V 反总：反应总体积，0.2mL；V 样本：加入样本体积，0.02mL；cpr：样本蛋白浓度，mg/mL； W：样本鲜重，g；d：光径，0.6cm；ε：氧化型邻联茴香胺消光系数，7.5×10-3mL/μmol/cm；T：反应时间，1min。

注意事项：

1、不同匀浆组织中 GOD 活力不一样，做正式试验之前请做 1-2 只预试，若 A2-A1>1, 则说明组织活力太高，必须用提取液稀释成适当浓度匀浆上清液，使 A2-A1<1，以提高检测灵敏度。实验过程中若出现 A1> A2 现象请将样本用提取液稀释成适当浓度.

2、最好两个人同时做此实验，一个人比色，一个人计时，以保证实验结果的准确性。

3、此试剂盒仅适用于动物组织和动物血清（浆）。