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地址:合肥市包河经济开发区花园大道17号

产品名称:非蛋白质巯基测试盒

产品规格:50管/24样,100管/48样

产品货号:LE-1-179,LE-2-179

产品报价:

免费咨询:0551-66107970

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货号

产品名称

检测方法

规格

售价(元)

LE-1-179

非蛋白质巯基测试盒

可见分光光度法

50/24

120

LE-2-179

非蛋白质巯基测试盒

微量法

100/48

200

非蛋白质巯基含量检测试剂盒说明书(可见分光光度法

产品内容:

提取液一:液体 25mL×1 瓶,4℃保存。

提取液二:液体 25mL×1 瓶,4℃保存。

试剂一:液体 50mL×1 瓶,4℃保存。

试剂二:粉剂×1 瓶,4℃避光保存。临用前加入 5mL 无水甲醇充分溶解备用。

标准品:粉剂×1 支,10mg 半胱氨酸,4℃保存。临用前加入 1.65mL 提取液溶解为 50µmol/ml 的半胱氨酸标准溶液。

提取液的配制:将提取液一和提取液二按体积比 1:1 的比例混合配制,按照样本数量配制并在当天用完。

产品说明:

生物体内巯基主要包括非蛋白质巯基和蛋白质巯基。巯基化合物在体内具有重要的解毒功能, 对生物体的自我调节具有非常重要的生理意义。

巯基基团与 5,5’- 二硫代-双-硝基苯甲酸DTNB)反应,生成黄色化合物,在 412nm 处有最大吸收峰。

自备实验用品:

可见分光光度计、离心机、恒温水浴锅、1mL 玻璃比色皿、甲醇、研钵/匀浆器和蒸馏水。

操作步骤:

一、样品的制备

1、动物、植物组织:称取约 0.1g,加入 1mL 的提取液,制备成 10%的匀浆10000g,常温离心10min,取上清待测。

2、细胞:按照细胞数量(104 个):提取液体积(mL) 500~1000:1 的比例(建议 500 万细胞加入 1mL  提取液),超声波破碎细胞(功率 300w,超声 3 秒,间隔 7 秒,总时间 3min)然 10000g,4℃离心 10min,取上清置冰上待测。

3、血清(浆),培养液:向 0.1mL 血清(浆)或培养液中加入 1mL 提取液,10000g,常温离心10min,取上清待测。

二、测定步骤

1、分光光度计预热 30min 以上,调节波长至 412nm,蒸馏水调零。

2、将 50µmol/mL 标准溶液用提取液稀释至 0.3、0.2、0.1、0.05、0.025、0.0125、0.00625、0.003125µmol/mL 的标准液,现用现配。

3、操作表

 

对照管

测定管

标准管

空白管

上清液(mL)

0.3

0.3

-

-

标准品(mL)

-

-

0.3

-

试剂一(mL)

0.65

0.65

0.65

0.65

试剂二(mL)

-

0.1

0.1

-

H2O(mL)

0.1

 

 

0.4

混匀,室温放置 10min,测定 412nm 吸光值,分别记为 A 对照、A 测定、

A 标准、A 空白,计算∆A 测定=A 测定-A 对照,算∆A 标准=A 标准-A 空白。

三、计算公式

1、 标准曲线的绘制:

以标准液浓度为 x 轴,∆A 标准为 y 轴,绘制标准曲线,得到标准方程 y=kx+b,将∆A 测定代入公式得到 x(µmol/mL)

2、 非蛋白质巯基含量计算:

(1)按样本鲜重计算

非蛋白质巯基含量(µmol/g 鲜重)=x×V 提取÷W=x÷W

(2)按血清、培养液体积计算:

非蛋白质巯基含量(µmol/mL)=x×(V 提取+V 液体)÷V 液体=1.1×x。

(3)按细胞数量计算:

非蛋白质巯基含量(µmol/104 cell)=x×V 提取÷500=0.002×x。

V 提取:加入提取液体积,1mL;W:样品质量,g;Cpr,样本蛋白浓度,mg/ml;500:500 万个细胞;V 液体:血清(浆)或培养液体积,0.1mL。

注意事项:

1、当吸光值大于 1.2 时,建议将上清液用提取液稀释后测定;吸光值过小时,建议提高样品质量或体积进行测定。


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