非蛋白巯基测定试剂盒说明书(分光光度法)

货号：LE-1-179

正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。

测定意义

生物体内巯基主要包括非蛋白质巯基和蛋白质巯基。巯基化合物在体内具有重要的解毒功 能，对生物体的自我调节具有非常重要的生理意义。

测定原理

巯基基团与 5,5’-  二硫代-双-硝基苯甲酸（DTNB）反应，生成黄色化合物，在 412nm 处有 最大吸收峰。

自备实验用品

天平、研钵、可见分光光度计、恒温水浴锅、1mL 玻璃比色皿、乙醇和蒸馏水。

试剂组成和配制

提取液：液体 50 mL×1 瓶，4℃保存。

试剂一：液体 40 mL×1 瓶，4℃保存。

试剂二：液体 2mL×1 瓶，4℃避光保存。

样品的制备

1、按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1 ：5~10  的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液）进行冰浴匀浆，然后 8000g ，4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。

2、血清，培养液：取 0.1mL 样本，加入 0.4mL 提取液，混匀，室温静置 10min,  然后 8000g， 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。

操作步骤

1、分光光度计预热30min，调节波长至 412nm ，双蒸水调零。

2、操作表

在 1mL 玻璃比色皿中加入如下试剂

计算公式

标准曲线：y =3.6222x- 0.0037 ，R² = 1 ，x 为标品浓度，单位 μmol/mL ，y 为吸光度 ΔA。

1、组织：

（1）按样本重量计算

非蛋白巯基含量(μmol/g  鲜重）=(ΔA+0.0037） ÷3.6222 ×V 样总÷W 

=0.276×(ΔA+0.0037） ÷W

（2）按样本蛋白浓度计算

非蛋白巯基含量(μmol/mg prot）= (ΔA+0.0037） ÷3.6222×V 样总÷Cpr

=0.276×(ΔA+0.0037） ÷Cpr

2、血清、培养液：

非蛋白巯基含量(μmol/L）= (ΔA+0.0037） ÷3.6222×5×10³

=1380× (ΔA+0.0037）

V 样总：加入提取液体积，1mL；W：样品质量，g  ；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；5 ：血清，培养液等液体样本稀释倍数；10³ ：1mmol/L=10³μmol/ L

试剂盒最低检出限为 10 μmol/L。