产品名称:总巯基测试盒
产品规格:50管/24样,100管/48样
产品货号:YX-C-A514,YX-W-A514
免费咨询:0551-66107970
货号
产品名称
检测方法
规格
售价(元)
YX-C-A514
总巯基测试盒
可见分光光度法
50管/24样
120
YX-W-A514
总巯基测试盒
微量法
100管/48样
200
总巯基含量检测试剂盒说明书(微量法)
产品内容:
提取液:液体 60 mL×1 瓶,4℃保存。
试剂一:液体 20 mL×1 瓶,4℃保存。
试剂二:液体 1 mL×1 支,4℃避光保存。
标准品:粉剂×1 支,10mg 还原型谷胱甘肽(GSH)。临用前加入 1.3mL 蒸馏水,浓度为 25µmol/mL,取一部分稀释成 0.5µmol/mL 待测,其余 4℃保存。
产品说明:
生物体内巯基主要包括谷胱甘肽巯基和蛋白质巯基。前者不仅能够修复氧化损伤的蛋白质,而且参与活性氧清除,后者对于维持蛋白质构象具有重要作用。通过测定总巯基含量和 GSH 含量,能够间接测定蛋白质巯基含量。
巯基基团与 5,5’-二硫代-双-硝基苯甲酸(DTNB)反应,生成黄色化合物,在 412nm 处有最大吸收峰。
自备实验用品:
天平、研钵、恒温水浴锅、可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96 孔板和蒸馏水。
操作步骤:
一、样品的制备:
动物、植物组织:称取约 0.1g,加入 1mL 的提取液,制备成 10%的匀浆,8000g,常温离心10min,取上清待测。
血清,培养液:直接测定。
二、测定步骤:
1、 分光光度计或酶标仪预热 30min 以上,调节波长至 412nm,蒸馏水调零。
2、 操作表
|
对照管 |
测定管 |
标准管 |
空白管 |
样品(μL) |
40 |
40 |
|
|
标准品(mL) |
|
|
40 |
40 |
试剂一(μL) |
150 |
150 |
150 |
150 |
试剂二(μL) |
|
10 |
10 |
|
H2O(μL) |
10 |
|
|
10 |
混匀,室温 10min,双蒸水调零,微量玻璃比色皿/96 孔板,测定 412nm 吸光值, 分别记为 A 对照、A 测定、A 标准、A 空白。 |
1、组织:
(1)按样本鲜重计算
总巯基含量(μmol/g 鲜重)=0.5×(A 测定-A 对照)÷(A 标准- A 空白)×V 样总÷W
=0. 5×(A 测定-A 对照)÷(A 标准- A 空白)÷W
(2)按样本蛋白浓度计算
总巯基含量(μmol/mg prot)= 0.5×(A 测定-A 对照)÷(A 标准- A 空白)÷Cpr
2、血清、培养液:
总巯基含量(μmol/L)=0.5× (A 测定-A 对照)÷(A 标准- A 空白) ×1000
=250×(A 测定-A 对照)÷(A 标准- A 空白)
0.5:标准品还原型谷胱甘肽的浓度,µmol/mL; V 样总:加入提取液体积,1mL;W:样品质量,g ;Cpr:样本蛋白浓度,mg/mL;1000:单位换算系数,1L=1000mL。
相关新闻: |
版权所有 © 合肥莱尔生物科技有限公司 皖ICP备17006278号-2