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产品名称:总巯基测试盒

产品规格:50管/24样,100管/48样

产品货号:LE-1-175,LE-2-175

产品报价:

免费咨询:0551-66107970

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货号

产品名称

检测方法

规格

售价(元)

LE-1-175

总巯基测试盒

可见分光光度法

50/24

120

LE-2-175

总巯基测试盒

微量法

100/48

200

总巯基含量检测试剂盒说明书(微量法

产品内容:

提取液:液体 60 mL×1 瓶,4℃保存。

试剂一:液体 20 mL×1 瓶,4℃保存。

试剂二:液体 1 mL×1 支,4℃避光保存。

标准品:粉剂×1 支,10mg 还原型谷胱甘肽(GSH)。临用前加入 1.3mL 蒸馏水,浓度为 25µmol/mL,取一部分稀释成 0.5µmol/mL 待测,其余 4℃保存。

产品说明:

生物体内巯基主要包括谷胱甘肽巯基和蛋白质巯基。前者不仅能够修复氧化损伤的蛋白质,而且参与活性氧清除,后者对于维持蛋白质构象具有重要作用。通过测定总巯基含量和 GSH 含量,能够间接测定蛋白质巯基含量。

巯基基团与 5,5’-二硫代-双-硝基苯甲酸(DTNB)反应,生成黄色化合物,在 412nm 处有最大吸收峰。

自备实验用品:

天平、研钵、恒温水浴锅、可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96 孔板和蒸馏水。

操作步骤:

一、样品的制备:

动物、植物组织:称取约 0.1g,加入 1mL 的提取液,制备成 10%的匀浆,8000g,常温离心10min,取上清待测。

血清,培养液:直接测定。

二、测定步骤:

1 分光光度计或酶标仪预热 30min 以上,调节波长至 412nm,蒸馏水调零。

2 操作表

 

对照管

测定管

标准管

空白管

样品(μL

40

40

 

 

标准品(mL

 

 

40

40

试剂一(μL

150

150

150

150

试剂二(μL

 

10

10

 

H2OμL

10

 

 

10

混匀,室温 10min,双蒸水调零,微量玻璃比色皿/96 孔板,测定 412nm 吸光值, 分别记为 A 对照、A 测定、A 标准、A 空白。

三、计算公式:

1、组织:

(1)按样本鲜重计算

总巯基含量(μmol/g 鲜重)=0.5×(A 测定-A 对照)÷(A 标准- A 空白)×V 样总÷W

=0. 5×(A 测定-A 对照)÷(A 标准- A 空白)÷W

(2)按样本蛋白浓度计算

总巯基含量(μmol/mg prot)= 0.5×(A 测定-A 对照)÷(A 标准- A 空白)÷Cpr 

2、血清、培养液:

总巯基含量(μmol/L)=0.5× (A 测定-A 对照)÷(A 标准- A 空白) ×1000

=250×(A 测定-A 对照)÷(A 标准- A 空白)

         0.5:标准品还原型谷胱甘肽的浓度,µmol/mL V 样总:加入提取液体积,1mL;W:样品质量,g ;Cpr:样本蛋白浓度,mg/mL;1000:单位换算系数,1L=1000mL。


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