产品名称:总抗氧化能力(T-AOC)测试盒
产品规格:50管/48样,100管/96样
产品货号:YX-C-A504,YX-W-A504
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货号
产品名称
检测方法
规格
售价(元)
YX-C-A504
总抗氧化能力(T-AOC)测试盒
可见分光光度法
50管/48样
160
YX-W-A504
总抗氧化能力(T-AOC)测试盒
微量法
100管/96样
300
总抗氧化能力(T-AOC)检测试剂盒说明书(微量法)
注意:正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。
产品内容:
提取液:液体 100mL×1 瓶,使用前预冷。
试剂一:液体 15mL×1 瓶,4℃保存。
试剂二:液体 6mL×1 瓶,4℃避光保存。
试剂三:液体 2mL×1 瓶,4℃避光保存。
标准品:粉剂×1 支,10mgFeSO4·7H2O。临用前加入 1.75ml 蒸馏水,滴加 1 滴浓硫酸,制备 20µmol/mL FeSO4 标准溶液。
混合液(现配现用):将试剂一、试剂二、试剂三 7:1:1 的比例混合,使用前 37℃预温。
产品说明:
测定对象中各种抗氧化物质和抗氧化酶等构成总抗氧化水平。在生物学、医学和药学研究中常常检测血浆、血清、唾液、尿液等各种体液,细胞或组织等裂解液、植物或中草药抽提液及各种抗氧化物(antioxidant)溶液的总抗氧化能力。
在酸性环境下,还原 Fe3+-三吡啶三吖嗪(Fe3+-TPTZ)产生蓝色的 Fe2+-TPTZ 的能力反映了总抗氧化能力。
自备实验用品:
恒温水浴锅、低温离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96 孔板和蒸馏水。
操作步骤:
一、样品的制备:
a. 血清、血浆、唾液或尿液样品
血浆(制备时可以使用肝素或柠檬酸钠抗凝,不宜使用 EDTA 抗凝)5000r/min 离心 10min, 取上清待测。血清、唾液或尿液样品直接用于测定,也可以-80℃冻存(不宜超过 30 d)后再测定。
b. 细胞或组织样品
收集约 100-200 万个细胞或者约 0.1g 组织,加入 1.0mL 预冷的提取液,匀浆或超声以充分破碎细胞并释放其中的抗氧化物,4℃、10000r/min 离心 5 分钟,取上清待测。需测定蛋白浓度。
二、测定步骤:
1、 标准曲线绘制:
将 20μmol/mL FeSO4 标准溶液稀释至 0.4、0.2、0.1、0.05、0.025、0.0125、0.00625、0.003125、0.00156μmol/mL,吸取 100μL 标准溶液(蒸馏水作空白)加入 100μL 试剂二,充分混匀,反应 10min, 双蒸水调零,测定 A593,计算ΔA=A 标准-A 空白,此时 Fe2+终浓度为 0.2、0.1、0.05、0.025、0.0125、0.00625、0.003125、0.00156、0.00078μmol/mL。
2、 分光光度计或酶标仪预热 30min 以上,调节波长至 593nm,蒸馏水调零。
3、 操作表
|
对照管 |
测定管 |
混合液(μL) |
180μL |
180μL |
样品(μL) |
|
6μL |
双蒸水(μL) |
24μL |
18μL |
充分混匀,反应 10min,双蒸水调零,吸取 200μL 于微量玻璃比色皿/96 孔板, 测定 593nm 吸光值。计算△Aˊ= A 测定-A 对照(注:对照管只需测定一次)。 |
三、总抗氧化能力计算公式
1、 标准曲线绘制
以 Fe2+终浓度为横坐标,以△A 为纵坐标绘制标准曲线,得到线性回归方程 y=kx+b,将△Aˊ带入方程求得 x(μmol/mL)。
2、计算公式:
单位定义:样品的抗氧化能力以达到同样吸光度变化值(△A)所需的标准液离子浓度表示。计算公式:
(1)按蛋白浓度计算
总抗氧化能力(U/mg prot)=x× V反总÷(V样× Cpr)=34×x÷ Cpr
(2)按样品质量计算
总抗氧化能力(U/g)=x× V反总÷(V样÷V样总×W)=34×x÷ W
(3)按细胞数量计算
总抗氧化能力(U/104cell)= x×V反总÷V样×V样总÷细胞数量= 34×x÷ 细胞数量
(4)按液体体积计算
总抗氧化能力(U/mL)=x× V反总÷V样 =34×x
V 样总:加入提取液体积,1 mL; V 反总:反应总体积,0.204mL;V 样:反应中样品体积, 0.006mL;W:样品质量,g;Cpr:样本蛋白浓度,mg/mL;细胞数量:以 104 为单位,以万计。
注意事项:
1、试剂二对人体有刺激性,请采取适当的防护措施。为了您的安全和健康,请穿实验服并戴乳胶手套操作。
2、尽量避免使用在酸性条件下呈蓝色或接近蓝色的样品,否则对本试剂盒的检测结果产生干扰。
3、样品中不宜添加Tween、Triton 和 NP-40 等去垢剂和 DTT、巯基乙醇等影响氧化还原反应的还原剂。
4、如果样品测定出来的吸光值在标准曲线范围以外,需把样品适当稀释或浓缩后再进行测定。
5、试剂盒 2-8℃保存。
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