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产品名称:总抗氧化能力(T-AOC)测试盒

产品规格:50管/48样,100管/96样

产品货号:YX-C-A504,YX-W-A504

产品报价:

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货号

产品名称

检测方法

规格

售价(元)

YX-C-A504

总抗氧化能力(T-AOC)测试盒

可见分光光度法

50/48

160

YX-W-A504

总抗氧化能力(T-AOC)测试盒

微量法

100/96

300

总抗氧化能力(T-AOC)检测试剂盒说明书微量法

注意:正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。

产品内容:

提取液:液体 100mL×1 瓶,使用前预冷。

试剂一:液体 15mL×1 瓶,4℃保存。

试剂二:液体 6mL×1 瓶,4℃避光保存。

试剂三:液体 2mL×1 瓶,4℃避光保存。

标准品:粉剂×1 支,10mgFeSO4·7H2O。临用前加入 1.75ml  蒸馏水,滴加 1 滴浓硫酸,制备 20µmol/mL FeSO4 标准溶液。

混合液(现配现用):将试剂一、试剂二、试剂三 7:1:1 的比例混合,使用前 37℃预温。

产品说明:

测定对象中各种抗氧化物质和抗氧化酶等构成总抗氧化水平。在生物学、医学和药学研究中常常检测血浆、血清、唾液、尿液等各种体液,细胞或组织等裂解液、植物或中草药抽提液及各种抗氧化物(antioxidant)溶液的总抗氧化能力。

在酸性环境下,还原 Fe3+-三吡啶三吖嗪(Fe3+-TPTZ)产生蓝色的 Fe2+-TPTZ 的能力反映了总抗氧化能力。

自备实验用品:

恒温水浴锅、低温离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96 孔板和蒸馏水。

操作步骤:

一、样品的制备:

a. 血清、血浆、唾液或尿液样品

血浆(制备时可以使用肝素或柠檬酸钠抗凝,不宜使用 EDTA 抗凝5000r/min 离心 10min, 取上清待测。血清、唾液或尿液样品直接用于测定,也可以-80℃冻存(不宜超过 30 d)后再测定。

b. 细胞或组织样品

收集约 100-200 万个细胞或者约 0.1g 组织,加入 1.0mL 预冷的提取液,匀浆或超声以充分破碎细胞并释放其中的抗氧化物,4℃、10000r/min 离心 5 分钟,取上清待测。需测定蛋白浓度。

二、测定步骤:

1、 标准曲线绘制:

20μmol/mL FeSO4 标准溶液稀释至 0.4、0.2、0.1、0.05、0.025、0.0125、0.00625、0.003125、0.00156μmol/mL,吸取 100μL 标准溶液(蒸馏水作空白)加入 100μL 试剂二,充分混匀,反应 10min, 双蒸水调零,测定 A593,计算ΔA=A 标准-A 空白,此时 Fe2+终浓度为 0.20.10.050.0250.01250.00625、0.003125、0.00156、0.00078μmol/mL。 

2、 分光光度计或酶标仪预热 30min 以上,调节波长至 593nm,蒸馏水调零。

3、 操作表

 

对照管

测定管

混合液(μL)

180μL

180μL

样品(μL)

 

6μL

双蒸水(μL)

24μL

18μL

充分混匀,反应 10min,双蒸水调零,吸取 200μL 于微量玻璃比色皿/96 孔板, 测定 593nm 吸光值。计算△Aˊ= A 测定-A 对照(注:对照管只需测定一次

三、总抗氧化能力计算公式

1、 标准曲线绘制

Fe2+终浓度为横坐标,以△A 为纵坐标绘制标准曲线,得到线性回归方程 y=kx+b,将△Aˊ带入方程求得 x(μmol/mL)。

2、计算公式:

单位定义:样品的抗氧化能力以达到同样吸光度变化值(△A)所需的标准液离子浓度表示。计算公式:

(1)按蛋白浓度计算

总抗氧化能力(U/mg prot)=x× V反总÷(V样× Cpr)=34×x÷ Cpr

(2)按样品质量计算

总抗氧化能力(U/g)=x× V反总÷(V样÷V样总×W)=34×x÷ W

(3)按细胞数量计算

总抗氧化能力(U/104cell)= x×V反总÷V样×V样总÷细胞数量= 34×x÷ 细胞数量

4)按液体体积计算

总抗氧化能力(U/mL)=x× V反总÷V样 =34×x

       V 样总:加入提取液体积,1 mL; V 反总:反应总体积,0.204mL;V 样:反应中样品体积, 0.006mL;W:样品质量,g;Cpr:样本蛋白浓度,mg/mL;细胞数量:以 104 为单位,以万计。

注意事项:

1、试剂二对人体有刺激性,请采取适当的防护措施。为了您的安全和健康,请穿实验服并戴乳胶手套操作。

2、尽量避免使用在酸性条件下呈蓝色或接近蓝色的样品,否则对本试剂盒的检测结果产生干扰。

3、样品中不宜添加Tween、Triton  NP-40 等去垢剂和 DTT、巯基乙醇等影响氧化还原反应的还原剂。

4、如果样品测定出来的吸光值在标准曲线范围以外,需把样品适当稀释或浓缩后再进行测定。

5、试剂盒 2-8℃保存。


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