酸性木聚糖酶(ACX)活性检测试剂盒说明书（可见分光光度法）

注意：正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。
产品内容：
缓冲液：液体 50mL×1 瓶，4℃保存。
试剂一：液体 10mL×1 瓶，4℃避光保存。

试剂二：液体 15mL×1 瓶，4℃避光保存。

试剂三：液体 5mL×1 瓶，4℃保存。
标准品：粉剂×1 支，4℃保存。10mg 木糖，临用前加入 667µL 蒸馏水溶解，得到 100µmol/mL木糖溶液，蒸馏水稀释 50 倍得到 2µmol/mL 木糖标准溶液。

产品说明：
木聚糖酶(EC 3.2.1.8)主要由微生物产生，能催化水解木聚糖，也被称为戊聚糖酶或半 纤维素酶， 可分解酿造或饲料工业中的原料细胞壁以及β-葡聚糖，降低酿造中物料的粘度，促进有效物质的释放，以及降低饲料中的非淀粉多糖，促进营养物质的吸收利用，因而广泛的应用于酿造和饲料工业中，酸性木聚糖酶(ACX)一般分离自耐酸的真菌，细菌及部分霉菌。
ACX 在酸性环境下能将木聚糖降解成还原性寡糖和单糖，进一步在沸水浴条件下与 3,5-二硝基水杨酸发生显色反应，在 540nm 处有特征吸收峰，反应液颜色的深浅与酶解产生的还原糖量成正比， 通过测定反应液在 540nm 吸光值增加速率，可计算 ACX 活力。

需自备的仪器和用品：
天平、低温离心机、恒温水浴锅，可见分光光度计、1 mL 玻璃比色皿和蒸馏水。

操作步骤：
一、粗酶液提取
1. 发酵液：发酵液于 8000rpm，4℃，离心 15min，取上清，作为待测样品。
2. 酶干粉：称约 1mg，加 1mL 缓冲液溶解，蒸馏水稀释 10 倍待测。
3. 组织样品：称约 0.1g 组织，加入 1mL 缓冲液，冰上充分研磨。8000rpm，4℃，离心 15min，取上清蒸馏水稀释 10 倍待测。
二、测定步骤
1、可见分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 540nm，蒸馏水调零。
2、样本测定（在 EP 管中加入下列试剂）

三、ACX 活性计算：

注意事项：

吸光度变化应该控制在 0.01~1.2 之间，否则加大样品量或稀释样品，注意计算公式中参与计算的稀释倍数要相应改变。