总糖含量检测试剂盒说明书（可见分光光度法）

注意：正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。

产品内容：

试剂一：液体 50mL×1 瓶，4℃保存；

试剂二：液体 50mL×1 瓶，4℃保存；

试剂三：液体 13mL×1 瓶，4℃避光保存；

标准品：粉剂×1 支，10mg 无水葡萄糖，4℃保存；临用前加 1mL 蒸馏水溶解为 10mg/mL 的葡萄糖标准品备用。

产品说明：

糖类物质是构成植物体的重要成分之一，也是新陈代谢的主要原料和贮存物质。总糖主要指具有还原性的葡萄糖，果糖，戊糖，乳糖和在测定条件下能水解为还原性的单糖的蔗糖，麦芽糖以及可能部分水解的淀粉。

总糖酸水解为还原糖，还原糖在碱性条件下与 DNS 试剂共热后被还原成氨基化合物，在碱性溶液中呈桔红色，还原糖的量与桔红色物质颜色的深浅成正比关系，以此测定样品中的总糖含量。

试验中所需的仪器和试剂：

可见分光光度计、水浴锅、可调式移液器、1mL 玻璃比色皿、研钵、蒸馏水。

操作步骤：

一、样品中总糖的提取：

组织：称取约 0.1g 样品，加入 1mL试剂一，1.5mL 蒸馏水，匀浆，沸水浴 30min，加入 1mL试剂二，混匀，用蒸馏水定容至 10mL，8000g 25℃离心 10min，取上清液待测。（注意稀释，见注意事项）

血清（浆）、液体样本：取 0.1mL 血清（浆），加入 0.1mL  试剂一，0.15mL 蒸馏水，匀浆，沸水浴 30min，加入 0.1mL 试剂二，混匀，用蒸馏水定容至 1mL，8000g 25℃离心 10min，取上清液待测。（注意稀释，见注意事项）

二、测定操作表：

1、分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 540nm，蒸馏水调零。

2、标准品准备：将标准品用蒸馏水稀释至 1、0.8、0.6、0.5、0.4、0.2、0.1mg/mL。

3、加样表：

混匀，在 540nm 下测定吸光值，并计算∆A 测=A 测定管-A 空白管、∆A 标=A 标准管-A 空白管。

总糖含量计算：

1、标准曲线的绘制：

以标准管的浓度为x轴，对应的∆A标为y轴绘制标准曲线，得到标准方程y=kx+b，将∆A测带入方程中计算得x（mg/mL）。

2、按样本鲜重计算：

总糖（mg/g 鲜重）=（x×V 样总）÷W×稀释倍数=10×x÷W×稀释倍数

3、按血清（血浆）液体体积计算：

总糖（mg/mL）=（x×V 提）÷V 样×稀释倍数=10×x×稀释倍数

V 样总：样本体积总体积，10mL； W：样本鲜重，g；V 提：液体或血清样本总体积，1mL；

V 样：液体或血清体积，0.1m

注意：

1、空白管只需做一管。

2、如果∆A 大于 1.2，需要将上清液用蒸馏水稀释，计算公式中乘以相应稀释倍数。

3、此试剂盒对于纤维素的分解程度无法达到 100%。

注意：最低检测限为 5mg/g 鲜重。