产品名称:果糖-1,6-二磷酸醛缩酶(FDA)测试盒
产品规格:50管/48样,100管/96样
产品货号:LE-1-238,LE-2-238
免费咨询:0551-66107970
货号 |
产品名称 |
检测方法 |
规格 |
售价(元) |
LE-1-238 |
果糖-1,6-二磷酸醛缩酶(FDA)测试盒 |
紫外分光光度法 |
50管/48样 |
1200 |
LE-2-238 |
果糖-1,6-二磷酸醛缩酶(FDA)测试盒 |
微量法 |
100管/96样 |
2300 |
果糖 1,6-二磷酸醛缩酶(FDA)试剂盒说明(微量法)
测定意义
植物叶绿体中果糖 1,6-二磷酸醛缩酶是光合作用中参与calvin 循环的重要酶。催化果糖 1,6- 二磷酸和景天庚酮糖 1,7-二磷酸的合成反应,在各种逆境胁迫下表现不同的响应。
测定原理
果糖 1,6-二磷酸醛缩酶催化果糖 1,6-二磷酸生成 3-磷酸甘油醛和磷酸二羟丙酮,在磷酸丙糖 异构酶和 α-磷酸甘油脱氢酶作用下催化 NADH 和磷酸二羟丙酮生成 NAD 和 α-磷酸甘油, 340nm 处吸光值的变化可反映果糖 1,6-二磷酸醛缩酶活性的高低。
自备实验用品及仪器
天平、震荡仪、低温离心机、研钵、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板。
试剂组成和配制
提取液一:液体 100mL×1 瓶,4℃保存。
提取液二:液体 100mL×1 瓶,4℃保存。
试剂一:液体 10mL×1 瓶,4℃避光保存。
试剂二:粉剂×1瓶,-20℃避光保存。临用前加 2mL 蒸馏水充分溶解;用不完的试剂分装后 -20℃保存,禁止反复冻融。
试剂三:粉剂×1瓶, -20℃避光保存。临用前加 2 mL 蒸馏水充分溶解; 用不完的试剂分装 后-20℃保存,禁止反复冻融。
试剂四:粉剂×1瓶, -20℃避光保存。临用前加 2 mL 蒸馏水充分溶解; 用不完的试剂分装 后-20℃保存,禁止反复冻融。
试剂五: 液体 2mL×1 瓶,4℃避光保存。
酶液提取
①总 FDA 酶提取: 建议称取约 0.1g 样本,加入 1mL 提取液一,冰浴匀浆后超声破碎(冰 浴,200W,破碎 3s,间歇 7s,总时间 1min),然后 4℃ , 8000g 离心 10min,取上清测定。
②胞浆和叶绿体 FDA 酶的分离: 按照植物组织质量(g):提取液体积(mL)为 1: 5~10 的 比例(建议称取约 0.1g 样本,加入 1mL 提取液一),冰浴匀浆后于 4℃ , 200g 离心 5min, 弃沉淀,取上清在 4℃ , 8000g 离心 10min,取上清用于测定胞浆 FDA 酶活性,取沉淀加 1mL 提取液二,震荡溶解后超声破碎(冰浴, 200W,破碎 3s, 间歇 7s,总时间 1min),然 后 4℃ , 8000g 离心 10min,取上清测定叶绿体中 FDA 酶活性。
建议测定总 FDA 酶活性,按照步骤①提取粗酶液,若需要分别测定胞浆和叶绿体中的 FDA, 则按照步骤②提取粗酶液。
测定操作
1、紫外分光光度计/酶标仪预热30min,调节波长至 340nm,蒸馏水调零。
2、取微量石英比色皿/96 孔板,依次加入 100μL 试剂一,20μL 试剂二,20μL 试剂三,20μL 试剂四,20μL 试剂五,20μL 粗酶液,充分混匀,记录 340nm 处 10s 的吸光值 A1 和 310s 的吸光值 A2,△A=A1-A2
计算公式
a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下
1、按照样本蛋白浓度计算
酶活单位定义:每毫克组织蛋白每分钟消耗 1 nmol 的 NADH 定义为一个酶活力单位。
FDA(nmol/min/mg prot)= ΔA÷ (ε×d)×V 反总÷(V 样×Cpr) ÷T=321.54×ΔA÷Cpr
2、按照样本质量计算
酶活单位定义:每克组织每分消耗 1 nmol 的 NADH 定义为一个酶活力单位。
FDA(nmol/min/g 鲜重)= ΔA÷ (ε×d)×V 反总÷(W ×V 样÷V 样总) ÷T=321.54×ΔA÷W
3、按照细胞数量计算
酶活单位定义:每 104 个细胞每分钟消耗 1 nmol 的 NADH 定义为一个酶活力单位。
FDA(nmol/min/104 cell)= ΔA÷ (ε×d)×V 反总÷(V 样×细胞数量÷V 样总) ÷T = 321.54×ΔA÷细胞数量
4、按照液体体积计算
酶活单位定义:每毫升液体每分钟消耗 1 nmol 的 NADH 定义为一个酶活力单位。 FDA(nmol/min/mL)= ΔA÷ (ε×d)×V 反总÷V 样÷T=321.54×ΔA
V 反总:反应体系总体积,0.2mL;ε:NADH 摩尔消光系数,6.22×103 L/mol /cm;d: 比色 皿光径, 1cm;V 样:加入样本体积,0.02mL;V 样总:加入提取液体积, 1mL; T:反应 时间,5 min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g
b. 用 96 孔板测定的计算公式如下
1、按照样本蛋白浓度计算
酶活单位定义:每毫克组织蛋白每分钟消耗 1 nmol 的 NADH 定义为一个酶活力单位。 FDA(nmol/min/mg prot)= ΔA÷ (ε×d)×V 反总÷(V 样×Cpr) ÷T= 643.08×ΔA÷Cpr
2、按照样本质量计算
酶活单位定义:每克组织每分消耗 1 nmol 的 NADH 定义为一个酶活力单位。
FDA(nmol/min/g 鲜重)= ΔA÷ (ε×d)×V 反总÷(W ×V 样÷V 样总) ÷T= 643.08×ΔA÷W
3、按照细胞数量计算
酶活单位定义:每 104 个细胞每分钟消耗 1 nmol 的 NADH 定义为一个酶活力单位。
FDA(nmol/min/104 cell)= ΔA÷ (ε×d)×V 反总÷(V 样×细胞数量÷V 样总) ÷T= 643.08×ΔA÷细胞数量
4、按照液体体积计算
酶活单位定义:每毫升液体每分钟消耗 1 nmol 的 NADH 定义为一个酶活力单位。 FDA(nmol/min/mL)= ΔA÷ (ε×d)×V 反总÷V 样÷T= 643.08×ΔA
V 反总:反应体系总体积,0.2mL;ε:NADH 摩尔消光系数,6.22×103 L / mol /cm; d:比 色皿光径,0.5cm;V 样:加入样本体积,0.02mL;V 样总:加入提取液体积, 1mL; T: 反应时间,5 min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g
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