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产品名称:磷酸丙糖异构酶(TPI)测试盒

产品规格:50管/48样,100管/96样

产品货号:YX-C-C701,YX-W-C701

产品报价:

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货号

产品名称

检测方法

规格

售价(元)

YX-C-C701

磷酸丙糖异构酶(TPI)测试盒

紫外分光光度法

50/48

1300

YX-W-C701

磷酸丙糖异构酶(TPI)测试盒

微量法

100/96

2500

磷酸丙糖异构酶(Triose-phosphate isomerase,TPI)试剂盒说明书(紫外分光光度法)

注意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义

磷酸丙糖异构酶是重要的糖酵解酶,广泛存在于动植物及微生物体内,在机体内参与葡萄糖代谢,在糖酵解,糖异生、脂肪酸生物合成及磷酸戊糖代谢中都发挥着重要作用。

测定原理

磷酸丙糖异构酶将磷酸二羟丙酮转化为 3-磷酸甘油醛,3-磷酸甘油醛与 NAD 在 3-磷酸甘油醛脱氢酶的作用下生成 3-磷酸甘油酸和 NADH,340nm 处的吸光度变化反映了磷酸丙糖异构酶的活性的高低。

自备实验用品及仪器

天平、低温离心机、研钵、紫外分光光度计、1mL石英比色皿。

试剂组成和配制

提取液:液体 50mL×1 瓶,4℃保存。

试剂一:液体 30mL×1 瓶,4℃避光保存。

试剂二:粉剂×1 瓶,-20℃避光保存。临用前加 5mL 蒸馏水充分溶解。

试剂三:粉剂×1 瓶,-20℃避光保存。临用前加 5 mL 蒸馏水充分溶解。

试剂四:粉剂×1 瓶,-20℃避光保存。临用前加 5 mL 蒸馏水充分溶解。

酶液提取

1. 组织:按照质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10 的比例(建议称取约0.1g,加入1mL提取液)加入提取液,冰浴匀浆后于 4℃,10000g 离心 10min,取上清置冰上待测。

2. 细胞:按照细胞数量(104个):提取液体积(mL)为 500~1000:1 的比例(建议500万细胞加入1mL提取液),冰浴超声波破碎细胞(功率 300w,超声3秒,间隔7秒,总时间3min);然后4℃,10000g 离心 10min,取上清置冰上待测。

3. 液体:直接检测。

测定操作

1. 分光光度计预热30min,调节波长至340nm,蒸馏水调零。

2. 取1mL石英比色皿,依次加入600μL试剂一,100μL试剂二,100μL试剂三,100μL试剂四,100μL 粗酶液,充分混匀,记录 340nm 处 10s 的吸光值 A1 和310s的吸光值 A2,△A=A2-A1

计算公式

1)按照样本蛋白浓度计算

酶活单位定义:每毫克组织蛋白每分钟生成 1 nmol 的 NADH 定义为一个酶活力单位。

TPI(nmol/min /mg prot)= ΔA÷(ε×d)×V 反总÷(V 样×Cpr) ÷T

=321.54×ΔA÷Cpr

2)按照样本质量计算

酶活单位定义:每克组织每分钟生成 1 nmol 的 NADH 定义为一个酶活力单位。

TPI(nmol/min /g)= ΔA÷(ε×d)×V 反总÷(W ×V 样÷V 样总) ÷T

=321.54×ΔA÷W

3)按照细胞数量计算

酶活单位定义:每 104个细胞每分钟生成1nmol的NADH定义为一个酶活力单位。

TPI(nmol/min /104cell)= ΔA÷(ε×d)×V 反总÷(V 样×细胞数量÷V 样总) ÷T

321.54×ΔA÷细胞数量

4)按照液体体积计算

酶活单位定义:每毫升液体每分钟生成 1 nmol 的 NADH 定义为一个酶活力单位。

TPI(nmol/min /mL)= ΔA÷(ε×d)×V 反总÷V 样÷T=321.54×ΔA

V 反总:反应体系总体积,1mL;ε:NADH 摩尔消光系数,6.22×103L/mol/cm;d:比色皿光径,1cm;V 样:加入样本体积,0.1mL;V 样总:加入提取液体积,1mL;T:反应时间,5 min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g

注意事项:配制好的试剂二、试剂三、试剂四 3 天内使用完。


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