果糖-1,6-二磷酸酶(Fructose 1,6-bisphosphatase，FBP)试剂盒说明书（紫外分光光度法）

规格：50管/48样

产品内容：

提取液：60mL×1瓶，4℃保存；

试剂一：粉剂×1瓶，-20℃保存；临用前加入40mL试剂四充分溶解待用，用不完的试剂4℃保存；

试剂二：液体×1瓶，4℃保存；临用前加入2.5mL蒸馏水充分溶解待用，用不完的试剂4℃保存；

试剂三：粉剂×1瓶，-20℃保存；临用前加入2.5mL蒸馏水充分溶解待用，用不完的试剂4℃保存；

试剂四：液体50mL×1 瓶， 4℃保存；

产品说明：

果糖-1,6 二磷酸酶又称果糖1,6 二磷酸酯酶，催化1,6 二磷酸果糖和水生成6 磷酸果糖和无机磷，在糖的异生代谢和光合作用同化物蔗糖的合成中起关键性的作用。

FBP 催化1,6 二磷酸果糖和水生成6 磷酸果糖和无机磷，在反应体系中添加的磷酸葡萄糖异构酶和6-磷酸葡萄糖脱氢酶依次催化生成6-磷酸葡萄糖酸和NADPH，340nm下测定NADPH增加速率，即可计算FBP 活性。

需自备的仪器和用品：

分光光度计、恒温水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1 mL 石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。

操作步骤：

一、样本的前处理

1、 细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（10⁴ 个）：提取液体积（mL）为500~1000：1 的比例（建议500 万细菌或细胞加入1mL 提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30 次）；8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

2、 组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10 的比例（建议称取约0.1g 组织，加入1mL 提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

二、测定步骤

1、 分光光度计预热30min 以上，调节波长至340nm，蒸馏水调零。

2、 将试剂一、二、三37℃(哺乳动物)或25℃(其它物种)预热10 分钟。

3、 加样表：

FBP 活性计算

（1） 按样本蛋白浓度计算

单位的定义：每mg 组织蛋白每分钟生成1 nmol 的NADPH 定义为一个酶活力单位。

FBP（U/mg prot）＝[ΔA×V 反总÷（ε×d）×10⁹]÷(V 样×Cpr) ÷T=321.5×ΔA÷Cpr

（2） 按样本鲜重计算

单位的定义：每g 组织每分钟生成1 nmol 的NADPH 定义为一个酶活力单位。

FBP（U/g 鲜重）＝[ΔA×V 反总÷（ε×d）×10⁹]÷(W ×V 样÷V 样总) ÷T=321.5×ΔA÷W

（3） 按细菌或细胞密度计算

单位的定义：每1万个细菌或细胞每分钟生成1 nmol 的NADPH 定义为一个酶活力单位。

FBP（U/10⁴ cell）＝[ΔA×V 反总÷（ε×d）×10⁹]÷(500×V 样÷V 样总) ÷T=0.643×ΔA

V 反总：反应体系总体积，1×10-3 L；ε：NADPH 摩尔消光系数，6.22×10³ L / mol /cm；d：比色皿光径，1cm；V 样：加入样本体积，0.1 mL；V 样总：加入提取液体积，1 mL；T：反应时间，5 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500：细菌或细胞总数，500 万。