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产品名称:果糖-1,6-二磷酸酶(FBP)/果糖-1,6-二磷酸酯酶试剂盒

产品规格:50管/48样,100管/96样

产品货号:LE-1-247,LE-2-247

产品报价:

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货号

产品名称

检测方法

规格

售价

LE-1-247

果糖-1,6-二磷酸酶(FBP)/果糖-1,6-二磷酸酯酶测试盒

紫外分光光度法

50/48

950

LE-2-247

果糖-1,6-二磷酸酶(FBP)/果糖-1,6-二磷酸酯酶测试盒

微量法

100/96

1800

果糖-1,6-二磷酸酶(FBP)试剂盒说明书(紫外分光光度法

产品内容:

提取液:60mL×1瓶,4℃保存;

试剂一:粉剂×1瓶,-20℃保存;临用前加入40mL试剂四充分溶解待用,用不完的试剂4℃保存;

试剂二:液体×1瓶,4℃保存;临用前加入2.5mL蒸馏水充分溶解待用,用不完的试剂4℃保存;

试剂三:粉剂×1瓶,-20℃保存;临用前加入2.5mL蒸馏水充分溶解待用,用不完的试剂4℃保存;

试剂四:液体50mL×1 瓶, 4℃保存;

产品说明:

果糖-1,6 二磷酸酶又称果糖1,6 二磷酸酯酶,催化1,6 二磷酸果糖和水生成6 磷酸果糖和无机磷,在糖的异生代谢和光合作用同化物蔗糖的合成中起关键性的作用。

FBP 催化1,6 二磷酸果糖和水生成6 磷酸果糖和无机磷,在反应体系中添加的磷酸葡萄糖异构酶和6-磷酸葡萄糖脱氢酶依次催化生成6-磷酸葡萄糖酸和NADPH,340nm下测定NADPH增加速率,即可计算FBP 活性。

需自备的仪器和用品:

分光光度计、恒温水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1 mL 石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。

操作步骤:

一、样本的前处理

1、 细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104 个):提取液体积(mL)为500~1000:1 的比例(建议500 万细菌或细胞加入1mL 提取液),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率20%或200W,超声3s,间隔10s,重复30 次);8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。

2、 组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10 的比例(建议称取约0.1g 组织,加入1mL 提取液),进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。

二、测定步骤

1、 分光光度计预热30min 以上,调节波长至340nm,蒸馏水调零。

2、 将试剂一、二、三37℃(哺乳动物)或25℃(其它物种)预热10 分钟。

3、 加样表:

试剂名称(μL)

测定管

样本

100

试剂二

50

试剂三

50

试剂一

800

将上述试剂按顺序加入1 mL石英比色皿中,立即混匀,加入最后一个试剂的同时开始时,在340 nm波长下记录反应1min后吸光度A1和反应6min 后的吸光度A2,计算ΔA=A2-A1。

FBP 活性计算

1、按样本蛋白浓度计算

单位的定义:每mg 组织蛋白每分钟生成1 nmol 的NADPH 定义为一个酶活力单位。

FBP(U/mg prot)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷(V 样×Cpr) ÷T=321.5×ΔA÷Cpr

2、按样本鲜重计算

单位的定义:每g 组织每分钟生成1 nmol 的NADPH 定义为一个酶活力单位。

FBP(U/g 鲜重)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷(W ×V 样÷V 样总) ÷T=321.5×ΔA÷W

3、按细菌或细胞密度计算

单位的定义:每1万个细菌或细胞每分钟生成1 nmol 的NADPH 定义为一个酶活力单位。

FBP(U/104 cell)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷(500×V 样÷V 样总) ÷T=0.643×ΔA

V 反总:反应体系总体积,1×10-3 L;ε:NADPH 摩尔消光系数,6.22×103 L / mol /cm;d:比色皿光径,1cm;V 样:加入样本体积,0.1 mL;V 样总:加入提取液体积,1 mL;T:反应时间,5 min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g;500:细菌或细胞总数,500 万。


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