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产品名称:锰过氧化物酶(MnP)试剂盒

产品规格:50管/24样,100管/48样

产品货号:LE-1-385,LE-2-385

产品报价:

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货号

产品名称

检测方法

规格

售价(元)

LE-1-385

锰过氧化物酶(MnP)测试盒

可见分光光度法

50/24

550

LE-2-385

锰过氧化物酶(MnP)测试盒

微量法

100/48

1050

锰过氧化物酶试剂盒说明书(可见分光光度法

产品内容:

试剂一:液体75mL×1 瓶,4℃保存。

试剂二:液体5mL×1 瓶,4℃保存。

试剂三:液体10mL×1 瓶,4℃避光保存。

试剂四:液体5mL×1 瓶,4℃保存。

产品说明:

锰过氧化物酶EC1.11.1.13)是一种含亚铁血红素的过氧化物酶,主要存在于担子菌中,属于木质素降解酶系,能有效的降解木质素及废水和土壤中比较难降解的氯化物,叠氮化合物、DTT, 多环芳烃等。锰过氧化物酶在Mn2+存在的条件下,将愈创木酚氧化为四邻甲氧基连酚,在465nm 有特征吸收峰。

自备实验用品及仪器:

天平、研钵、低温离心机、可见分光光度计、1 mL 玻璃比色皿、恒温水浴锅。

操作步骤:

一、酶液提取

1、组织:按照质量g):试剂一体积(mL)为1:5~10 的比例(建议称取约0.1g,加入1mL 试剂一 加入试剂一,冰浴匀浆后于4℃,10000g 离心10min,取上清置于冰上待测。

2、细胞:按照细胞数量(104 个):试剂一体积(mL)为500~1000:1  的比例(建议500  万细胞加入1mL 试剂一),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3 秒,间隔7 秒,总时间3min); 然后4℃,10000g 离心10min,取上清置于冰上待测。

3、培养液或其它液体:直接检测。

二、测定操作

 

对照管

测定管

试剂一(μL)

600

500

试剂二(μL)

 

100

试剂三(μL)

200

200

样品(μL)

100

100

试剂四(μL)

100

100

充分混匀,于 37℃反应 10min,于 1mL 玻璃比色皿,蒸馏水调零,测定 465nm处吸光值,记为 A 对照管和 A 测定管,△A=A 测定管- A 对照管。

三、酶活计算公式

1.按照蛋白浓度计算

酶活性定义:每毫克蛋白每分钟氧化1nmol 愈创木酚所需的酶量为一个酶活力单位。

MnP 活性(nmol/min/mg prot)=△A÷(ε×d)×V 反总÷(V ×Cpr)÷T= 83×△ A÷Cpr

2.按照样本质量计算

酶活性定义:每克样品每分钟氧化1nmol 愈创木酚所需的酶量为一个酶活力单位。

MnP 活性(nmol/min/g)=△A÷(ε×d)×V 反总÷(V ×W÷V 样总)÷T= 83×△ A÷W

3.按照细胞数量计算

酶活性定义:每104   个细胞每分钟氧化1nmol  愈创木酚所需的酶量为一个酶活力单位。

MnP 活性(nmol/min /104 cell)=△A÷(ε×d)×V 反总÷(V ×细胞数量÷V 样总)÷T= 83×△ A÷细胞数量

4.按照液体体积计算

酶活性定义:每升培养液每分钟氧化1nmol 愈创木酚所需的酶量为一个酶活力单位。

MnP 活性(nmol/min /L)=△A÷(ε×d)×V 反总÷V 样÷T= 8.3×104×△ A

ε:愈创木酚摩尔消光系数:12100L/mol/cm;d:比色皿光径,1cm;V 反总:反应总体积,1mL; V 样:反应中样本体积,0.1mL;V 样总:加入提取液体积,1mL;Cpr:样本蛋白浓度,mg/mL; W:样本质量,g;T:反应时间,10min。


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