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产品名称:植酸酶试剂盒

产品规格:50管/24样,100管/48样

产品货号:LE-1-382,LE-2-382

产品报价:

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货号

产品名称

检测方法

规格

售价(元)

LE-1-382

植酸酶测试盒

可见分光光度法

50/24

540

LE-2-382

植酸酶测试盒

微量法

100/48

960

植酸酶(phytase)试剂盒说明书(可见分光光度法

测定意义

植酸酶(phytase)是催化植酸及其盐类水解为肌醇与磷酸(盐)的一类酶的总称,属磷酸单酯水解酶,它能将食品和饲料中植酸及其盐转化为可供有机体利用的有效磷,降低粪便中的磷含量,减轻对环境的污染,改善营养成分的吸收和利用,因此具有极其广泛的研究和应用价值

测定原理

植酸酶在一定温度和 pH 值条件下,水解底物植酸钠生成无机磷与肌醇衍生物,无机磷在酸性环境中与钼酸铵显色剂反应生成蓝色复合物,在 700nm 处有特征吸收峰,根据 700nm 处吸光值变化可计算得植酸酶活性。

自备实验用品及仪器

天平、低温离心机、可见分光光度计、1 mL 玻璃比色皿、恒温水浴锅,超声溶解器,回旋式振荡器。

试剂组成和配制

提取液:液体 50mL×1 瓶,4℃保存。

缓冲液:液体 25mL×1 瓶,4℃保存。

试剂一:粉剂×1 瓶,4℃保存,临用前加缓冲液 10mL 配制,现用现配;用不完的试剂 4℃ 保存一个月。

试剂二:液体 25mL×1 瓶,4℃保存。

显色剂:粉剂×6 瓶,4℃保存,临用前根据用量每瓶加 1mL 双蒸水溶解,再加 4mL 试剂二混匀

样本处理

1、酶制剂:按照质量(g):提取液体积(mL)为 1:500~1000 的比例(建议称取约 0.001g,加入 1mL 提取液)加入提取液,在超声波溶解器上溶解 15min,再用回旋式振荡器振荡15min,待测。

2、组织:按照质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g,加入 1mL提取液)进行冰浴匀浆,在超声波溶解器上溶解 15min,再用回旋式振荡器振荡 15min, 4℃,4000g 离心 10min,取上清待测。

3、饲料样品:饲料烘干粉碎,过 40 目筛,按照质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g,加入 1mL 提取液)进行冰浴匀浆,在超声波溶解器上溶解 15min,再用回旋式振荡器振荡 15min,4℃,4000g 离心 10min,取上清待测。

4、培养液等液体样品,混匀直接测定。

测定操作表

 

对照管

测定管

样本(µL)

100

100

37℃温育 5min

缓冲液(µL)

400

 

试剂一(µL)

 

400

混匀,37℃温育 30min

95℃,10min 终止反应,冷却至室温

显色剂(µL)

150

150

混匀,37℃静置 15min,10000g,室温,离心 5min,取上清,蒸馏水

调零,测定 700nm 处吸光值,△A=A 测定管-A 对照管。每个测定管设一个对照管。

酶活性计算公式

标准曲线:y = 0.2764x + 0.0082,R2 = 0.9998;x 为标准品浓度(μmol/mL),y 为吸光值。

1、按照蛋白浓度计算

酶活性定义: 37℃,pH5.5 的条件下,每毫克蛋白每分钟从 5mmol/L 的植酸钠溶液中释放出 1μmol 的无机磷为一个酶活力单位。

植酸酶活性(μmol/min/mg prot)=(△ A-0.0082)÷0.2764÷Cpr÷T =0.1206×(△ A-0.0082)÷Cpr

2、按照样本质量计算

酶活性定义: 37℃,pH5.5 的条件下,每克样本每分钟从 5mmol/L 的植酸钠溶液中释放出 1μmol 的无机磷为一个酶活力单位。

植酸酶活性(μmol/min /g 鲜重)=(△ A-0.0082)÷0.2764÷W÷T =0.1206×(△ A-0.0082)÷W

3、培养液等液体样品

酶活性定义: 37℃,pH5.5 的条件下,每毫升液体每分钟从 5mmol/L 的植酸钠溶液中释放出 1μmol 的无机磷为一个酶活力单位。

植酸酶活性(μmol/min /mL)=(△ A-0.0082)÷0.2764÷T =0.1206×(△ A-0.0082)

Cpr:样本蛋白含量,mg/mL;W:样本质量,g;T:反应时间,30min。

注意事项

1、显色剂需要临用前根据用量配制,每一瓶是 10 个样本的用量,新配制的显色剂若有颜色则已经污染或者试剂过期,应放弃使用。

2、ΔA 线性范围为 0.01-2。


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