漆酶活性检测试剂盒说明书（可见分光光度法）
注意：正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。
规格：50T/48S
产品内容：
提取液：液体 60mL×1 瓶，4℃保存
试剂一：液体 50mL×1 瓶，4℃保存。
试剂二：粉剂×2 瓶，4℃避光保存。
产品说明：
漆酶（CE1.10.3.2）是一种含铜的多酚氧化酶，属于铜蓝氧化酶家族，漆酶存在菇、菌及植物中， 是一种环保型酶，其独特的催化性质在生物检测中有广泛的应用。
漆酶分解底物 ABTS 产生 ABTS 自由基，在 420nm 处的吸光系数远大于底物 ABTS，测定 ABTS 自由基的增加速率，可计算得漆酶活性。
试验中所需的仪器和试剂：
可见分光光度计、低温离心机、1mL 玻璃比色皿、可调式移液枪、天平、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水，水浴锅。
操作步骤：
一、粗酶液提取：
组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入1mL 提取液），进行冰浴匀浆。10000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
细胞：按照细胞数量（104 个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细胞加入 1mL 提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率 300w，超声 3 秒，间隔 7 秒，总时间 3min）；然后 4℃，10000g 离心10min，取上清置于冰上待测。
培养液：直接检测
二、测定步骤：
1、 分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 420nm，蒸馏水调零。
2、 水浴锅温度调至 45℃。
3、 工作液的配制：一瓶试剂二用 25mL 试剂一溶解。现用现配。
4、 操作表：在 1mL 玻璃比色皿中分别加入下列试剂：

酶活定义：每毫克蛋白每分钟氧化 1nmol 底物 ABTS 所需的酶量为一个酶活力单位。

漆酶酶活（U/mg prot）=△A÷ε÷d×V 反总×109÷（V 样×Cpr）÷T= 61.7×△A÷Cpr

酶活定义：每克样品每分钟氧化 1nmol 底物 ABTS 所需的酶量为一个酶活力单位。

漆酶酶活（U/g 鲜重）=△A÷ε÷d×V 反总×109÷（V 样×W÷V 样总）÷T= 61.7×△A÷W

酶活定义：每 104 个细胞每分钟氧化 1nmol 底物 ABTS 所需的酶量为一个酶活力单位。

漆酶酶活（U/104 cell）=△A÷ε÷d×V 反总×109÷（V 样×500÷V 样总）÷T= 0.123×△A

酶活定义：每 mL 液体每分钟氧化 1nmol 底物 ABTS 所需的酶量为一个酶活力单位。

漆酶酶活（U/mL）=△A÷ε÷d×V 反总×109÷V 样÷T= 61.7×△A

注意事项：

工作液需临用前配制，并且尽快使用，4℃保存一周，若变色则不能使用。

空白管为检测各试剂组分质量的检测孔，正常情况下，OD 值变化不超过 0.05