木质素过氧化物酶（Linin peroxidase，Lip）试剂盒说明书（紫外分光光度法）

注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

规格：50管/48样

产品内容：

试剂一：液体80mL×1 瓶，4℃保存。

试剂二：液体10mL×1 瓶，4℃避光保存。

试剂三：液体5mL×1 瓶，4℃保存。

产品说明：

木质素过氧化物酶（EC1.11.1.14）是一种含亚铁血红素的过氧化物酶，属于木质素降解酶系， 在木质素生物降解、造纸工业、纺织工业、芳香化合物转化与降解及环境污染控制等方面具有较大的应用潜力。

木质素过氧化物酶氧化藜芦醇生成藜芦醛，在310nm 处有特征吸收峰。

自备实验用品及仪器：

天平、研钵、低温离心机、紫外分光光度计、1 mL 石英比色皿。

操作步骤：

一、酶液提取

1. 组织：按照质量（g）：试剂一体积(mL)为1：5~10 的比例（建议称取约0.1g，加入1mL 试剂一）加入试剂一，冰浴匀浆后于4℃，10000g 离心10min，取上清置于冰上待测。

2. 细胞：按照细胞数量（10⁴ 个）：试剂一体积（mL）为500~1000：1 的比例（建议500 万细胞加入1mL 试剂一），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3 秒，间隔7 秒，总时间3min）；然后4℃，10000g 离心10min，取上清置于冰上待测。

3. 培养液或其它液体：直接检测。

二、测定操作

三、酶活计算公式

1． 按照蛋白浓度计算

酶活性定义：每毫克蛋白每分钟氧化1nmol 藜芦醇所需的酶量为一个酶活力单位。

LiP 活性（nmol/min /mg prot）=△A÷（ε×d）×V 反总÷（V 样×Cpr）÷T= 215×△ A÷Cpr

2． 按照样本质量计算

酶活性定义：每克样品每分钟氧化1nmol 藜芦醇所需的酶量为一个酶活力单位。

    LiP 活性（nmol/min /g）=△A÷（ε×d）×V 反总÷（V 样×W÷V 样总）÷T= 215×△ A÷W

3． 按照细胞数量计算

酶活性定义：每10⁴ 个细胞每分钟氧化1nmol 藜芦醇所需的酶量为一个酶活力单位。

LiP 活性（nmol/min /10⁴ cell）=△A÷（ε×d）×V 反总÷（V 样×细胞数量÷V 样总）÷T

                           = 215×△ A÷细胞数量

4．按照液体体积计算

    酶活性定义：每升培养液每分钟氧化1nmol 藜芦醇所需的酶量为一个酶活力单位。

    LiP 活性（nmol/min /L）=△A÷（ε×d）×V 反总÷V 样÷T= 2.15×10⁵×△ A

    ε：藜芦醛摩尔消光系数：9300L/mol/cm；d：比色皿光径，1cm；V 反总：反应总体积，1mL；V 样：反应中样本体积，0.1mL；V 样总：加入提取液体积，1mL；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；W：样本质量，g；T：反应时间，5min。