产品名称:多酚氧化酶(PPO)测试盒
产品规格:50管/24样,100管/48样
产品货号:YX-C-A404,YX-C-A404
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货号 |
产品名称 |
检测方法 |
规格 |
售价(元) |
YX-C-A404 |
多酚氧化酶(PPO)试剂盒 |
可见分光光度法 |
50管/24样 |
380 |
YX-W-A404 |
多酚氧化酶(PPO)试剂盒 |
微量法 |
100管/48样 |
750 |
多酚氧化酶(PPO)活性检测试剂盒说明书(微量法)
注意:正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
产品内容:
提取液: 液体 100mL×1 瓶,4℃保存,用前混匀即可;
试剂一: 液体 20mL×1 瓶,4℃保存;
试剂二: 液体 5mL×1 瓶,4℃保存。
产品说明:
PPO(EC1.10.3.1)是一种广泛存在于植物体内的含铜的氧化酶,能使一元酚和二元酚氧化产生醌,从而引起褐化,与果蔬加工、茶叶品质和组培等密切相关。
PPO 能够催化邻苯二酚产生邻苯二醌,后者在 410nm 有特征光吸收。
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96 孔板、研 钵、冰和蒸馏水。
操作步骤:
一、粗酶液提取:
1 、收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清; 按照每 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液,超声 波破碎细菌或细胞(功率 20%,超声 3 秒, 间隔 10 秒, 重复 30 次); 8000g 4℃离心 10 分钟,取 上清,置冰上待测。
2 、称取约 0. 1g 组织,加入 1mL 提取液进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10 分钟,取上清,置冰上待测。
二、测定步骤:
1 、分光光度计或酶标仪预热 30min 以上,调节波长至 410nm ,蒸馏水调零。
2 、样本测定(在 EP 管中依次加入下列试剂)
试剂名称(μL) |
测定管 |
对照管 |
试剂一 |
200 |
200 |
试剂二 |
50 |
50 |
样本 |
50 |
|
煮沸的样本 |
|
50 |
37℃(哺乳动物)或 25℃(其它物种)中准确水浴 10min 后, 迅速放入沸水中加热 10min |
充分混匀,5000g,常温离心 10min,收集上清, 取 200μL 至微量玻璃比色皿或 96 孔板中,410nm 处检测测定管和对照管吸光度,计算ΔA=A 测定-A 对照。
注意:每个测定管需要设置一个对照管,可以在不同对照管中加入不同样品的粗酶液,然后集中进 行 5 min 沸水浴处理。
PPO 活性计算:
用微量玻璃比色皿测定的计算公式如下
1. 按样本蛋白浓度计算:
单位的定义: 每分钟每 mg 组织蛋白在每 mL 反应体系中使 410nm 处吸光值变化 0.01 定义为一个酶 活力单位。
PPO(U/mg prot)= ΔA÷0.01×V 反总÷ (Cpr×V 样) ÷T =60×ΔA÷Cpr
2. 按样本鲜重计算:
单位的定义: 每分钟每 g 组织在每 mL 反应体系中使 410nm 处吸光值变化 0.01 定义为一个酶活力单 位。
PPO(U/g 鲜重) =ΔA÷0.01×V 反总÷ (W÷V 样总×V 样) ÷T =60×ΔA÷W
3. 按细菌或细胞数量计算:
单位的定义: 每分钟每 1 万个细菌或细胞在每 mL 反应体系中使 410nm 处吸光值变化 0.01 定义为一 个酶活力单位。
PPO(U/104 cell)=ΔA÷0.01×V 反总÷ (500÷V 样总×V 样) ÷T =0. 12×ΔA
用 96 孔板测定的计算公式如下
1. 按样本蛋白浓度计算:
单位的定义: 每分钟每 mg 组织蛋白在每 mL 反应体系中使 410nm 处吸光值变化 0.005 定义为一个 酶活力单位。
PPO(U/mg prot)=ΔA÷0.005×V 反总÷ (Cpr×V 样) ÷T =120×ΔA÷Cpr
2. 按样本鲜重计算:
单位的定义: 每分钟每 g 组织在每 mL 反应体系中使 410nm 处吸光值变化 0.005 定义为一个 酶活力单位。
PPO(U/g 鲜重) =ΔA÷0.005×V 反总÷ (W×V 样÷V 样总) ÷T =120×ΔA÷W
3. 按细菌或细胞数量计算:
单位的定义: 每分钟每 1 万个细菌或细胞在每 mL 反应体系中使 410nm 处吸光值变化 0.005 定义为 一个酶活力单位。
PPO(U/104 cell)=ΔA÷0.005×V 反总÷ (500÷V 样总×V 样) ÷T =0.24×ΔA
V 反总: 反应体系总体积,0.3mL;V 样: 加入反应体系中样本体积,0.05 mL;V 样总: 加入提取 液体积,1 mL;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本鲜重,g;500:细菌或细胞数量,500 万; T:反应时间,10min。
注意事项:不同样本的多酚氧化酶最佳的反应温度略有差别,可在 25-37℃之间进行调节。
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