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产品名称:多酚氧化酶(PPO)测试盒

产品规格:50管/24样,100管/48样

产品货号:LE-1-167,LE-2-167

产品报价:

免费咨询:0551-66107970

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货号

产品名称

检测方法

规格

售价(元)

LE-1-167

多酚氧化酶(PPO)试剂盒

可见分光光度法

50管/24样

380

LE-2-167

多酚氧化酶(PPO)试剂盒

微量法

100管/48样

750

多酚氧化酶(PPO)活性检测试剂盒说明书(可见分光光度法

产品简介:

PPO 主要存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,是一种含铜的氧化酶,能使一元酚和二元 酚氧化产生醌,从而引起褐化,与果蔬加工、茶叶品质和组培等密切相关。

PPO 能够催化邻苯二酚产生醌,后者在 410nm 有特征光吸收。

试验中所需的仪器和试剂:

可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL 玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。

产品内容:

提取液:液体 60mL×1 瓶,4℃保存,用前混匀;

试剂一:液体 40mL×1 瓶,4℃保存;

试剂二:液体 10mL×1 瓶,4℃保存。

操作步骤:

一、粗酶液提取:

1.  收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清; 按照每 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液,超声 波破碎细菌或细胞(功率 20%,超声 3 秒, 间隔 10 秒, 重复 30 次); 8000g 4℃离心 10 分钟, 取上清,置冰上待测。

2.  称取约 0. 1g 组织,加入1mL 提取液进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10分钟,取上清,置冰上待测。

二、测定操作表:

1 、分光光度计预热 30min 以上,调节波长至 410nm ,蒸馏水调零。

2 、样本测定(在 EP 管中依次加入下列试剂)

试剂名称(μL)

测定管

对照管

试剂一

600

600

试剂二

150

150

样本

150

 

煮沸的样本

 

150

37℃(哺乳动物)或 25℃(其它物种) 中准确水浴 10min 后, 迅速放入沸水中加热 10min。

冷却后,5000g ,常温离心 10min ,收集上清,用蒸馏水调零,410nm 处检测测定管和对照管吸 光度,计算ΔA=A 测定-A 对照。

注意

每个测定管需要设置一个对照管,可以在不同对照管中加入不同样品的粗酶液,然后集中进行 5 min 沸水浴处理。

PPO 活性计算:

1)按样本蛋白浓度计算:

单位的定义:每分钟每 mg 组织蛋白在每 mL 反应体系中使 410nm 处吸光值变化 0.01 定义为一个酶 活力单位。

PPO(U/mg prot)= ΔA÷0.01×V 反总÷ Cpr×V 样) ÷T =60×ΔA÷Cpr

2)按样本鲜重计算:

单位的定义:每分钟每 g 组织在每 mL 反应体系中使 410nm 处吸光值变化 0.01 定义为一个酶活力单位。

PPO(U/g  鲜重) =ΔA÷0.01×V 反总÷ W÷V 样总×V 样) ÷T =60×ΔA÷W

3)按细菌或细胞数量计算:

单位的定义:每分钟每 1 万个细菌或细胞在每 mL 反应体系中使 410nm 处吸光值变化 0.01 定义为一 个酶活力单位。

PPO(U/104 cell)= ΔA÷0.01×V 反总÷ 500÷V 样总×V 样) ÷T =0. 12×ΔA

反总:反应体系总体积,0.9mL;V 样: 加入反应体系中样本体积,0. 15 mL;V 样总: 加入提取 液体积,1 mL;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g;500:细菌或细胞数量,500 万;T:反应时间,10min。

注意事项:

不同样本的多酚氧化酶最佳的反应温度略有差别,可在 25-37℃之间进行调节。


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